Screening de actividad α-fucosidasa en hongos

Abstract

La interacción glicanos – receptores proteicos es responsable de diversos procesos fisiológicos. Por lo cual, alteraciones en los patrones de glicosilación celular puede dar lugar a diversas enfermedades. Las exoglicosidasas son excelentes herramienta en el análisis glicómico y acopladas al análisis por espectrometría de masa contribuyen a la elucidación de la composición glicosídica de los glicanos de las glicoproteínas y en particular a la identificación de los enlaces glicosídicos. Dentro de los azúcares presentes en glicoproteínas se destacan N-acetilglucosamina, manosa, galactosa, glucosa, N-acetil galactosamina y fucosa. En particular el rol de la fucosa es relevante en procesos tumorales y de infección parasitaria o viral. En este contexto es interesante la purificación de enzimas con actividad α-fucosidasa. Este trabajo se enfoca en la búsqueda de α- fucosidasas extracelulares en hongos aislados del ambiente. Se realizó el screening en 9 hongos diferentes utilizando las siguientes condiciones de cultivo: fucosa 0.25% como inductor, 30 ºC, 150 rpm y 5 días de incubación y p-nitrofenil α-L-fucopiranosa como sustrato para la evaluación de la actividad. Se obtuvo actividad en una cepa de Fusarium sp. A los efectos de maximizar la producción de la enzima se estudió la influencia del inductor (fucosa 0.25% y mucina gástrica porcina (PGM) 1%) y el tiempo de cultivo (5 y 7 días). La mayor producción de enzima (53 U/L) se obtuvo utilizando fucosa como inductor y 5 días de incubación a 30ºC y 150 rpm, mientras que no se observó expresión de la enzima cuando se utilizó PGM como inductor.