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Please use this identifier to cite or link to this item: https://hdl.handle.net/20.500.12008/29232 How cite
Title: Impacto funcional de la inhibición farmacológica de Tmem176b en diferentes subpoblaciones de células dendríticas
Authors: Victoria Montero, Sabina
Obtained title: Doctor en Ciencias Médicas
University or service that grants the title: Universidad de la República (Uruguay). Facultad de Medicina. PROINBIO
Tutor: Hill, Marcelo
Segovia, Mercedes
Type: Tesis de doctorado
Keywords: Células dendríticas, Tmem176b, Cáncer, BayK844
Descriptors: CÉLULAS DENDRÍTICAS/efectos de los fármaco, MICROAMBIENTE TUMORAL/efectos de los fármacos, NEOPLASIAS/inmunología
Issue Date: 2021
Content: Agradecimientos …2. Resumen… 6. Lista de abreviaturas. 7. Introducción… 10. Cáncer. Inmunidad …10. Inmunoedición del cáncer… 11- Ciclo cáncer- sistema inmune y el rol del microambiente tumoral ... 15. Células dendríticas: DCs …18. Heterogeneidad ontogénica, fenotípica y funcional de las DCs… 19. Contribución de las cDC en el contexto de la respuesta inmune anti tumoral… 30- Eje: cDC2 – Th17 – respuesta anti tumoral…32. Tmem176b como un regulador iónico del inflamasoma NLRP3... 33- Inflamasoma NLRP3 ... 37. Inmunoterapia contra el cáncer… 42. Generalidades…. 42. Bloqueadores de Puntos de Control Inmune (BPC) … 43. Nanopartículas en Biomedicina: Nanoterapia ... 48. Rol de la Inflamación en la terapia antitumoral... 52. Objetivos… 59. Objetivos específicos... 60. Materiales y métodos …61. Reactivos y Anticuerpos…61. Animales… 61. Cultivo de líneas celulares… 61. Modelos tumorales y tratamientos con NP-BayK8644, eNP o BayK8644 libre...62. Cultivo primario de células dendríticas derivadas de médula ósea (BMDCs)... 62. Estudio de la presentación cruzada en células dendríticas esplénicas de ratón... 63. Nanopartículas de quitosano (NPs) cargadas con BayK8644 (NP-BayK8644) ó con la sonda 6-coumarin (NP-6cou)… 64. Captación de NPs por las células detríticas de la médula ósea (BMDC)…67. Estudios de localización por microscopía confocal ... 67. Cuantificación de la Activación Inflammasoma ... 68. Análisis ex vivo de células T CD8+ totales y específicas de antígeno tumoral…69. Análisis de la expresión génica en el TME por RT-PCR cuantitativa... 70. Evaluación in vitro, de la capacidad de las BMDCs de diferenciar células T CD4+ a un fenotipo Th17... 71. Evaluación ex vivo, de la capacidad de las cDC2 de diferenciar células T CD4+ a un fenotipo Th17... 72. Transferencia adoptiva de células (ACT) con un perfil Th17… 73. Citotoxicidad in vivo contra células que expresan el antígeno tumoral... 74. Análisis estadístico...74. Resultados...80. Parte I... 80. El BayK8644 libre inhibe la presentación cruzada de antígeno por las DCs esplénicas in vitro... 80. Encapsulación del BayK8644 en nanopartículas de quitosano… 82. Las nanopartículas de quitosano no inhibien la presentación cruzada de antígenos y promueven la activación del inflamasoma NLRP3...86. La administración terapéutica con BayK8644 encapsulado en NPs de quitosano aumenta la sobrevida y retarda el crecimiento tumoral en animales de una manera dependiente de Tmem176b... 94. La infiltración del microambiente tumoral por células T CD8+ totales y específicas de tumor se asocian con la capacidad de control tumoral en animales tratados con NPBayK8644...98. Screening de mecanismos contra-reguladores a nivel intratumoral en animales tratados con BayK8644 encapsulado en NPs de quitosano... 102 . ParteI II... 104. Las BMDCs derivadas de animales Tmem176b (WT) y Tmem176b-/- poseen un fenotipo de células dendríticas convencionales de tipo 2 (cDC2)…104. Las BMDCs derivadas de animales Tmem176b-/- poseen mayor capacidad de diferenciar células T CD4+ provenientes de animales OT-II a células Th17...105. Subpoblaciones de cDC2 residentes de ganglio drenante de tumor (TDLN) provenientes de animales Tmem176b-/- poseen mayor capacidad de diferenciación a células Th17 comparada con cDC2 provenientes de animales WT... 107. La transferencia adoptiva de células con un fenotipo Th17 efector mejora el efecto anti-tumoral de la monoterapia con anticuerpo α-PD1... 113. La transferencia adoptiva de células con un fenotipo Th17 efector provocó un mayor porcentaje de lisis específica, en un modelo in vivo de animales portadores de tumor y tratados con anticuerpo monoclonal α-PD1...114. Discusión... 116. Conclusión... 129. Perspectivas... 130. Anexo1... 132Anexo 2... 176. Referencias Bibliográficas ...225
Abstract: Nuestro grupo ha reportado que la proteína Tmem176b es un canal/transportador iónico intracelular fuertemente expresado en células dendríticas (DCs), que bloquea la respuesta inmune anti-tumoral. Identificamos al compuesto BayK8644 como un inhibidor de Tmem176b. BayK8644 promueve el control tumoral en protocolos profilácticos, pero no en tumores establecidos a través de la activación del inflamasoma y células T CD8+. Entendimos que era necesario profundizar en los mecanismos inmunológicos implicados, con el fin de obtener información que nos permitiera mejorar la respuesta terapéutica. Dada la relevancia de las DCs en la respuesta anti-tumoral y la fuerte expresión de Tmem176b en esos leucocitos, nos planteamos como objetivo general estudiar el impacto de la inhibición de Tmem176b en diferentes sub-poblaciones de DCs (cDC1 y cDC2). Aquí hemos demostrado que la inhibición de Tmem176b con BayK8644 resulta en el bloqueo de una de las funciones más específicas de las cDC1, la presentación cruzada de antígenos. Mostramos que la encapsulación de BayK8644 en NP (NP-BayK8644) previene la inhibición de la presentación cruzada de antígenos mientras mantiene la capacidad de activación del inflamasoma. El tratamiento con NP-BayK8644 de animales que poseen tumores establecidos controló el crecimiento tumoral de una manera dependiente de Tmem176b. El control tumoral se asoció con una mayor infiltración tumoral por células T CD8+ totales y específicas de tumor. Por tanto, la formulación de BayK8644 en NP mejoró la eficacia antitumoral del compuesto libre al evitar la inhibición de la presentación cruzada de antígenos al tiempo que desencadena la activación del inflamasoma. Por otra parte, caracterizamos mecanismos inmunológicos desencadenados por cDC2 luego de la deleción génica y el bloqueo farmacológico de Tmem176b. Mostramos en un modelo in vitro y ex vivo que las DC2 de animales portadores de tumores Tmem176b-/- o WT tratados con BayK8644 promovió la diferenciación de células Th17 de una manera dependiente del inflamasoma. Experimentos de transferencia celular adoptiva mostraron que las células Th17 mejoran los efectos anti-tumorales del bloqueo de PD-1, sugiriendo que el eje cDC2/Th17 podría jugar un papel relevante en la terapia anti-PD1. En suma, caracterizamos el impacto de la inhibición de Tmem176b en diferentes subpoblaciones de DCs. Ese conocimiento aportó elementos para desarrollar formulaciones que mejoren el efecto anti-tumoral del BayK8644. Además describimos mecanismos desencadenados al inhibir a Tmem176b que potenciarían respuestas inmunes durante la terapia oncológica basada en el bloqueo de PD-1.
Publisher: Udelar. FM
Citation: Victoria Montero, S. Impacto funcional de la inhibición farmacológica de Tmem176b en diferentes subpoblaciones de células dendríticas [en línea] Tesis de doctorado. Montevideo: Udelar. FM, 2021
License: Licencia Creative Commons Atribución - No Comercial - Sin Derivadas (CC - By-NC-ND 4.0)
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