99mTc-Tocilizumab un nuevo agente de imagen molecular en Mieloma Múltiple

Abstract

La interleucina 6 (IL-6) es una molécula clave en la patogénesis del Mieloma Múltiple (MM). La sobre-expresión de su receptor, IL6R, en las células de MM se puede utilizar como blanco para el desarrollo de potenciales agentes moleculares para su diagnóstico. El Tocilizumab (Actemra®) es un anticuerpo monoclonal contra IL6R. El objetivo de este trabajo es el desarrollo y evaluación, a través de distintos métodos químicos y biológicos, la marcación de 99mTc-Tocilizumab utilizando dos agente quelantes, Succidinimyl-hidrazinonicotinamida (HYNIC) y tricarbonilo. En primer lugar se derivatizó el Tocilizumab (Roche) con HYNIC y se marcó utilizando 99mTc/tricina/Sn2 Cl a temperatura ambiente. La marcación del anticuerpo con [99mTc(CO)3(OH2 )3]+ se llevó a cabo incubando 45 min a 37ºC. La pureza radioquímica (PQR) fue evaluada por ITLC-SG y HPLC. Se realizaron estudios in-vitro de unión y competencia con células de MM U266 hasta 120 minutos. Se obtuvieron imágenes fluorescentes y por microscopía de fuerza atómica de las células U266. Se realizaron estudios in-vivo en ratones CD1 normales (n=3). Se observó una PRQ mayor a 90% con ambos quelantes utilizados, siendo estable y sin mostrar transquelación significativa al menos durante 24 hs. La microscopía confocal mostró la capacidad del Tocilizumab-FITC para reconocer IL6R en las células U266. Los experimentos in-vitro de unión y desplazamiento confirman la especificidad de reconocimiento del 99mTc-Tocilizumab por IL6R. Los estudios de biodistribución mostraron absorción hepática y eliminación renal principalmente. De los resultados obtenidos se concluyó que ambos marcados del Tocilizumab con 99mTco4-, vía HYNIC y vía tricarbonilo, podrían ser potenciales agentes de imagen para el diagnóstico de Mieloma Múltiple.

Il6 is a key molecule in the pathogenesis of MM. Tocilizumab is a monoclonal antibody against IL6R. In our work we conjugate 99mTc-Tocilizumab using two different chelators (HYNIC and tricarbonyl). Tocilizumab was derivatized with HYNIC and labeled using 99mTc/ tricine/SnCI2 at room temperature, incubated during 45 min. PQR was assessed by ITLC-SG and HPLC. In vitro studies were carried out up to 120 min. Fluorescent and atomic force microscopy images were obtained with U266 MM cells. In vivo studies were carried out in normal Cd1 mice (N=3). Radiochemical purity was >90% using both chelators, remaining stable with no significant transchelation during 24 h. Confocal microscopy showed the ability of TCZ-FITC to recognize IL6R in U266 cells. Specificity of union of 99mTc-Tocilizumab to IL6R was demonstrated by in vitro competitive experiments. Biodistribution studies showed liver uptake and renal elimination. We conclude that labeling 99mTc-TCZ is performed by booth strategies with high RQP and specificity of binding, so the could become potential imaging agents for diagnosis of MM.