Análisis molecular de los genes BRCA1, BRCA2 y metilación global en tumores mamarios caninos

Abstract

Esta tesis basada en 3 artículos investigó aspectos moleculares de los tumores de mama en caninos. En el artículo 1 se estudió la región del intrón 9-10/exón 10 del gen BRCA1 de muestras de sangre las cuales fueron enviadas para su secuenciación. Se estudió a nivel poblacional y evolutivo, polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) localizados en una región de corte y empalme del exón más grande del gen BRCA1 en una población de perras con distintos tipos histopatológicos de tumores mamarios. Concluimos que las mutaciones en esta región de splicing del mayor exón de BRCA1 no estarían relacionadas con la aparición de tumores mamarios en caninos en este grupo de animales. En el artículo 2 se estudió una muestra poblacional emparentada de 4 razas de caninos con antecedentes familiares de tumores de mama. Se extrajo sangre de los animales para análisis moleculares de ADN, para amplificar las regiones de interés en los genes BRCA1 y BRCA2, identificando mutaciones relevantes. Los productos de PCR fueron confirmados mediante electroforesis en gel y enviados para secuenciación. Las secuencias obtenidas fueron analizadas utilizando el software BioEdit, comparando los individuos con y sin tumores. Como resultado, se encontraron variantes previamente descritas en Ensembl, pero no se hallaron nuevas variantes en las secuencias analizadas. En el artículo 3 se comparó el nivel de metilación global del ADN entre tejido tumoral y tejido mamario sano de 11 perras enteras con tumores de mama. Ambos tipos de tejido fueron extraídos durante la cirugía, y se realizó la estadificación clínica y clasificación histopatológica de los mismos. A partir de muestras pareadas de tejido tumoral y tejido mamario sano de cada animal, se extrajo ADN y se determinaron los niveles de metilación genómica global mediante cuantificación relativa de 5-metil 2-desoxicitidina (5mdC) utilizando HPLC. Los resultados revelaron una hipometilación global del ADN en el tejido tumoral en comparación con el tejido mamario sano (P < 0.05). Esta diferencia fue más pronunciada en tumores de alto grado histopatológico, caracterizados por un comportamiento clínico agresivo y una elevada tasa de metástasis. Este trabajo resalta la importancia de continuar con esta línea de investigación que a futuro se pueda usar la metilación global del ADN como biomarcador para dar un pronóstico más certero de esta enfermedad.