Péptidos sintéticos para inmunodiagnóstico de hidatidosis humana : estrategias de identificación, selección y valoración

Abstract

La equinococosis quística (EQ), o hidatidosis, es una infección parasitaria zoonótica causada por cestodos del complejo genético Echinococcus granulosus sensu lato (s.l.), siendo la enfermedad tropical desatendida de mayor prevalencia e incidencia en Uruguay. En humanos, la EQ es una patología con curso normalmente asintomático, cuyo diagnóstico involucra técnicas imagenológicas; requiriendo equipamiento especializado y de alto costo, así como personal capacitado. Por su parte, aunque las técnicas serológicas para su diagnóstico son una opción de menor costo y realizables en instalaciones básicas, los inmunoensayos actuales para EQ presentan valores de sensibilidad y especificidad variables; haciendo que no sean la primera opción diagnóstica. Estos problemas suelen deberse a las características de los antígenos parasitarios utilizados (crudos, purificados y/o recombinantes), por lo que el desarrollo de péptidos sintéticos como antígenos para inmunodiagnóstico ha ganado popularidad recientemente. Dichos péptidos simulan/imitan epítopes B presentes en proteínas antigénicas naturales, y pueden sintetizarse de manera automatizada no-biológica a gran escala. La selección de dichos péptidos es el paso más importante para alcanzar el éxito deseado. En ese sentido, la disponibilidad actual del genoma/proteoma de diversos organismos, sumado al desarrollo de algoritmos potentes para análisis bioinformáticos, han contribuido enormemente a la predicción in silico de péptidos antigénicos con potencial valor inmunodiagnóstico. Por ello, en la presente tesis partimos del proteoma completo reportado para E. granulosus s.l. y, aplicando diversas estrategias bio-inmuno-informáticas, seleccionamos más de 60 péptidos potencialmente útiles para inmunodiagnóstico de EQ humana. Los mismos se sintetizaron comercialmente y luego se valoró su desempeño inmunodiagnóstico utilizando una amplia seroteca de estudio, generada en la presente tesis, compuesta por muestras provenientes de pacientes con EQ confirmada por cirugía, de donantes sanos y de pacientes con otras parasitosis. Finalmente, aunque los resultados obtenidos no superaron el desempeño diagnóstico alcanzado por el kit comercial utilizado como referencia, los mismos permitieron concluir sobre modificaciones futuras a realizar sobre el flujo de trabajo bio-inmuno-informático desarrollado, de forma tal que puedan alcanzarse mejores resultados. Asimismo, dichos resultados permitieron generar evidencia empírica relacionada con diversas propiedades y características que los péptidos sintéticos deben cumplir/exhibir para ser potencialmente útiles en técnicas de inmunodiagnóstico para EQ humana. En suma, en la presente tesis se generaron importantes conocimientos teóricos y experimentales que, a futuro, permitirán avanzar en el desarrollo de inmunoensayos basados en péptidos sintéticos, potencialmente útiles para diagnosticar diversas patologías infecciosas.