Aplicación de la PCR convencional para la detección de patógenos en muestras de mastitis bovina con cultivos sin crecimiento en las técnicas convencionales

Abstract

La mastitis es una de las enfermedades más importante a nivel de predios lecheros por su impacto a nivel económico, ocasionando pérdidas por disminución en la producción, disminución en la calidad de la leche, gastos en tratamientos y descarte de animales. Es importante un diagnóstico preciso y temprano de la enfermedad, con el objetivo de instaurar un tratamiento rápido y prevenir el contagio del resto de los animales a través de un plan de control. El siguiente estudio fue diseñado con el objetivo de demostrar que para el diagnóstico de mastitis no existe un método que por sí solo sea cien por ciento confiable, por lo que, se evaluó el uso de PCR para el diagnóstico de muestras de leche con mastitis clínica que presentaron cultivo sin crecimiento mediante técnicas tradicionales en tambo, y buscamos identificar si existe algún tipo de correlación entre la incidencia de mastitis con los días en leche de las vacas y con el número de lactancia de cada animal; también determinar cuál es el microorganismo que mayor prevalencia tiene en los episodios de infección. En nuestro estudio partimos de muestras de vacas con mastitis clínica y con cultivo bacteriano en tambo negativo, se realizó PCR tiempo final, se detectaron por esta técnica molecular tres bacterias, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae y Streptococcus uberis, ya que investigaciones nacionales indican que son los patógenos más prevalentes en Uruguay. Trabajamos con muestras de leche de 153 vacas, que fueron tomadas en un muestreo de un predio particular por el veterinario del establecimiento en el mes de diciembre de 2022, en un único muestreo, las mismas fueron identificadas con el número de caravana de cada animal y remitidas al laboratorio de la Unidad de Microbiología de Facultad de Veterinaria, donde se conservaron a -80°, para su posterior análisis. Se extrajo ADN de cada una de las muestras para luego realizar la técnica de PCR en tiempo final de cada patógeno y los resultados obtenidos se registraron en una hoja de cálculo Excel. Se calculó el porcentaje de muestras positivas por lo menos a uno de los tres agentes y luego la proporción de muestras positivas a cada uno de ellos de forma individual. Se encontró un alto porcentaje de muestras positivas (61,2%) por lo menos a una de estas bacterias, siendo el principal patógeno detectado Staphylococcus aureus (39,2%) seguido por Streptococcus dysgalactiae (35,3%). Quedó demostrado con el resultado de nuestro trabajo, sumado a antecedentes de trabajos anteriores, que el cultivo bacteriano da lugar a resultados falsos negativos y por tanto no sería recomendable usar solo este método diagnóstico para evaluar problemas de mastitis en un establecimiento. También se observó que animales con más lactancias presentan una mayor incidencia de mastitis, y con respecto a los días en leche obtuvimos resultados que arrojan una mayor incidencia de mastitis en el primer y último tercio de lactancia. Consideramos que el diagnóstico por cultivo debe ser complementado con otras técnicas para un adecuado diagnóstico de los agentes causales de mastitis.