"Determinación del efecto in vitro de la carbetocina (CB) y/o del dimetilsulfóxido (DMSO), sobre la actividad de colagenasas en cérvix de ovejas en fase folicular"

Abstract

La inseminación artificial transcervical en la especie ovina está limitada por la estrechez del cérvix. En la dilatación cervical participan enzimas que degradan la matriz extracelular (Metaloproteinasas de la Matriz extracelular o MMPs), en especial las MMP-2 y MMP-9. La actividad de las mismas es dependiente de hormonas (Estrógenos, Oxitocina) y factores inflamatorios (Prostaglandinas, Estrógenos, Radicales libres), entre otros. Experimentos previos in vivo e in vitro mostraron evidencias de que la Carbetocina (Cb, análogo sintético de la Oxitocina) y el Dimetilsulfóxido (DMSO) podrían actuar en forma aditiva/sinérgica sobre la actividad de la MMP-2. En esta Tesis se propone estudiar el efecto de dosis crecientes de DMSO (0, 0.25, 0.5, 1.0 y 2.0 %) en presencia o no de Cb (100 ng/ml) sobre la actividad enzimática de las formas Activada (A) y Latente (L) de las MMP-2 y 9 en cérvix ovino, determinada mediante zimografía en gelatina SDS-PAGE. La actividad de las formas A y L y la relación A/L de MMP fueron analizadas mediante test no paramétricos. Los datos fueron analizados mediante el test de Wilcoxon para muestras pareadas para detectar los efectos de la zona cervical (craneal y caudal) y para el efecto de la Cb (con o sin Cb) y mediante el Test de Friedman con un test posterior de Dunn´s para muestras pareadas, para detectar el efecto de las diferentes dosis de DMSO utilizadas; Para el caso de las interacciones se utilizó el programa GraphPad Prism 10. La actividad de la forma A y L de la MMP-9 fue escasa y esporádica, en un 19,4% de las muestras analizadas. En cambio, la actividad de la forma L de la MMP- 2 fue afectada tanto por la zona cervical, la dosis de DMSO, la presencia de Cb y por las interacciones entre ellos. Se destaca que la actividad de L MMP-2 fue mayor con las dosis de DMSO de 0.5 a 2%, respecto al control no tratado y en presencia de Cb. La actividad de la forma A fue afectada solo por el tratamiento con DMSO, siendo mayor respecto al control no tratado a dosis de 1%. La relación entre las formas A y L de la MMP-2 (Rel A/L) fue afectada por la zona cervical y por el tratamiento con DMSO, destacándose que la Rel A/L de la MMP-2 fue menor en el tratamiento con DMSO 1% respecto al control no tratado. En conclusión, los resultados permiten consolidar el concepto de que la actividad de la MMP-2 predomina respecto a la de la MMP-9 en las modificaciones de la matriz extracelular cervical en ovejas en fase folicular y aportan evidencias para investigar el potencial uso del DMSO y su asociación con Cb como agente farmacológico para facilitar la penetrabilidad cervical al momento de la IA en ovinos.