Bioanálisis de modificaciones postraduccionales nitroxidativas del fibrinógeno humano Consecuencias funcionales : estudios in silico e in vitro

Abstract

La Tesis aborda el efecto de la 3-nitrotirosina (NO2Tyr) en el fibrinógeno (Fg) y su conexión con el accidente cerebrovascular isquémico (ACVi), en el contexto del distrés nitroxidativo. A través de técnicas avanzadas de Cromatografía Líquida acoplada a Espectrometría de Masas Tándem (LC-MS/MS), se identificaron veinte sitios de nitración en el Fg. Se observó un aumento significativo en los niveles de NO2Tyr en el Fg de pacientes con ACVi en comparación con controles, específicamente en los residuos BβTyr452, BβTyr475 y γTyr380, sugiriendo un potencial diagnóstico para la nitración de Tyr. El desarrollo de Ensayos de Inmunoabsorción Ligados a Enzimas (ELISA) permitió detectar y cuantificar NO2Tyr en el plasma, revelando concentraciones elevadas en pacientes con ACVi. Esto corrobora la presencia de un estado de distrés nitroxidativo en estos individuos, subrayando la relevancia de NO2Tyr como un biomarcador. El análisis de los procesos de fibrinoformación y fibrinolisis mostró que los pacientes con ACVi presentan un tiempo de coagulación (Tc) significativamente mayor y un tiempo de fibrinolisis (Tf) prolongado, lo que sugiere una capacidad fibrinolítica reducida y posibles alteraciones en la funcionalidad del coágulo. Además, se investigaron trombos extraídos de pacientes tratados con trombectomía mecánica, donde se identificaron proteínas nitradas, incluyendo Fg y MMP-9. La heterogeneidad en tamaño y composición de los trombos sugiere que las proteínas nitradas podrían ser útiles como biomarcadores clínicos para evaluar el ACVi. Finalmente, se realizó modelado molecular y simulaciones de dinámica molecular del Fg humano, que permitieron obtener un modelo completo del Fg humano, y revelaron que la nitración de γTyr380 afecta la estructura del Fg, alterando interacciones cruciales que podrían influir en la polimerización y fibrinolisis. Estos hallazgos proporcionan una visión más clara sobre cómo las modificaciones postraduccionales, como la nitración, impactan la estructura y funcionalidad del Fg. En conjunto, la investigación resalta la importancia de la nitración del Fg en el contexto del ACVi, sugiriendo que este mecanismo podría jugar un papel relevante en su patogénesis. Los resultados abren la puerta al desarrollo de nuevos biomarcadores y enfoques terapéuticos, además de enfatizar la necesidad de seguir explorando las modificaciones postraduccionales en el Fg y otras proteínas relacionadas para mejorar la comprensión de las enfermedades cardiovasculares.