Generación y caracterización funcional y fisicoquímica de mutantes de cisteína de la triparredoxina peroxidasa citosólica de Trypanosoma cruzi

Abstract

Las peroxirredoxinas (Prx) son una familia de enzimas definidas dentro de las peroxidasas. Se encuentran ampliamente distribuidas y expresadas en muchos organismos, además son muy conservadas. Las peroxirredoxinas en Trypanosoma cruzi son las triparredoxinas peroxidasas, las cuales se han caracterizado como factores de virulencia, por lo que se cree que pueden llegar a ser blancos atractivos para la generación de drogas contra la enfermedad de Chagas producida por T. cruzi. La unidad funcional de las triparredoxina peroxidasas es un homodímero donde cada monómero es necesario para la catálisis enzimática, ya que uno contiene a la cisteína peroxidática y otro a la resolutiva, es por esto que se clasifican en la subfamilia de Prx 2-Cys típicas. El ciclo catalítico de estas enzimas tiene como finalidad reducir el peróxido de hidrógeno con la oxidación del tiol de la cisteína peroxidática (CP-S-) a ácido sulfénico (CP-SOH) y posterior resolución mediante un puente disulfuro con la cisteína resolutiva (CR). En la tesina se trabajó con la proteína triparredoxina peroxidasa citosólica de Trypanosoma cruzi (c-TXNPx) que presenta, además de los dos residuos de cisteína catalíticos, otras cinco cisteínas en su secuencia. Se construyeron dos nuevos mutantes de cisteína a serina, pQE30-c-TXNPx-C71S y pQE30-c-TXNPx-C76S con la finalidad de estudiar el rol de estas cisteínas en su estructura y función. Estas construcciones, junto a la construcción wild type, fueron expresadas de manera recombinante en E. coli. Una vez purificadas se realizaron ensayos preliminares de actividad peroxidasa y de oligomerización.