Obtención de anticuerpos anti-IgM de esturión ruso (Acipenser gueldenstaedtii) como herramienta para evaluar los niveles de IgM sérica en esturiones en cultivo)

Abstract

En el presente trabajo nos propusimos obtener anticuerpos específicos anti-IgM de esturión ruso y utilizarlos como herramienta para evaluar los niveles de IgM sérica en esturión ruso cultivados en granjas acuícolas de nuestro país. Las inmunoglobulinas IgM de esturión se purificaron a partir de suero siguiendo cuatro metodologías distintas, siendo la combinación de precipitación con sulfato de amonio 33 % seguida por diálisis extensiva contra buffer Tris a baja concentración iónica del sobrenadante la que brindó mejores resultados. Con el objetivo de evaluar la purificación, se efectuó un análisis por electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE) en condiciones reductoras y no reductoras de las fracciones obtenidas en cada etapa. En la fracción final de purificación se obtuvo: a) en condiciones no reductoras una banda principal de 180 kDa cuyo tamaño e identificación corresponden a la inmunoglobulina IgM de esturión b) en condiciones reductoras se obtuvieron bandas principales de 70 kDa y 25 kDa cuyos tamaños coinciden con los tamaños para la cadena pesada y liviana de inmunoglobulina IgM de esturión, respectivamente. Las bandas obtenidas a partir de las fracciones de purificación se identificaron mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF-TOF). La IgM purificada, se utilizó en carácter de antígeno en ratones. La inmunización se siguió en intervalos aproximados de 20 días mediante la extracción de suero y medición de título de anticuerpos mediante Elisa de anticuerpos. Losanticuerpos anti-IgM obtenidos a partir del suero de ratones se utilizaron para comparar por Western Blot la concentración de IgM sérica en muestras de sueros de esturión cultivados en invierno y verano (condiciones de ausencia o presencia de estrés crónico por temperatura). Si bien no se alcanzó significancia estadística, se observó una tendencia al aumento en los niveles de IgM en los sueros de peces expuestos a altas temperaturas (grupos de verano) respecto a los expuestos a baja temperatura (grupos de invierno), a ́un a pesar de que los niveles de proteínas séricas disminuyeron significativamente durante el verano. De hecho, al normalizar los niveles de IgM respecto a los niveles de proteínas totales, si se observo un aumento significativo de la IgM sérica en los esturiones expuestos a altas temperaturas. Los resultados obtenidos en este trabajo profundizan a la comprensi ́on del sistema inmune adaptativo del esturi ́on ruso, y aportan una herramienta molecular valiosa para investigar la respuesta inmunitaria en esta especie de peces.