Estandarización y validación de nuevas técnicas para el diagnóstico de Mycobacterium Bovis

Abstract

La tuberculosis bovina (TBB) es una enfermedad bacteriana crónica de los animales causada por el complejo de Mycobacterium tuberculosis, principalmente por M. bovis. El ganado es considerado como el principal reservorio de M. bovis y constituye la primera fuente de infección de esta especie para los seres humanos, siendo considerada en estos casos como una zoonosis. Debido a su importancia es que desde hace años existen campañas para control y erradicación a nivel mundial, con resultados parcialmente satisfactorios. Los programas de control implementados se basan en pruebas, sacrificios de animales positivos y certificación de establecimientos libres de TBB. Desde el punto de vista diagnóstico, el desarrollo de nuevas pruebas que busquen corregir las falencias presentes y brindar alternativas resulta crucial para contribuir a las campañas sanitarias de esta enfermedad. En este sentido, el objetivo del presente trabajo fue la estandarización de diferentes pruebas para el diagnóstico de esta enfermedad, comparándolas con los métodos clásicos utilizados en nuestro país (intradermotuberculinización). Para esto se desarrollaron dos pruebas diagnósticas, de las cuales una de ellas (ELISA), permite la detección de anticuerpos circulantes, técnica ya descrita por otros autores pero que brinda datos alentadores al utilizar el antígeno P22, más específico con respecto a los probados anteriormente. Por otra parte, el desarrollo de la Droplet digital PCR (ddPCR), técnica de última generación, que ha sido utilizada previamente para el diagnóstico de tuberculosis en pacientes humanos, demostrando una elevada sensibilidad y especificidad en comparación con otras técnicas moleculares. Los resultados de las técnicas serológicas desarrolladas presentaron una gran variabilidad, demostrando ser útiles para la detección de animales no reaccionantes a las pruebas rutinarias. Fueron 38 (25%) los animales negativos a la prueba intradérmica (PAC) que presentaron anticuerpos circulantes frente a las proteínas P22 y/o PPD de M. bovis, por lo que se sugiere que podrían ser animales en anergia. Por su parte, la estandarización de la técnica de ddPCR permitió la detección de menores números de bacilos en comparación con la técnica de PCR a tiempo final. Se logró la detección de M. bovis en bovinos de un rodeo comercial a partir de muestras de sangre entera, demostrando que la técnica resulta de utilidad para el diagnóstico de la infección por dicho agente. Los resultados obtenidos muestran el desarrollo de dos técnicas diagnósticas para la tuberculosis bovina que podrían ser de utilidad para brindar apoyo a los programas de control en nuestro país.