Efecto de la estación del año y la tensión de oxígeno sobre la capacidad de desarrollo in vitro en ovocitos bovinos

Abstract

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la estación, sobre la competencia ovocitaria tras la MIV-FIV a 5% o 20% de O2. En regiones templadas, durante el verano, el ganado en actividad de pastoreo puede estar expuesto a estrés calórico agudo, el cual puede afectar la calidad y la competencia de los ovocitos. La tensión suprafisiológica de oxígeno (20%), utilizada normalmente durante la maduración (MIV) y fecundación in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, puede causar un incremento en la producción de especies reactivas de oxígeno, exacerbando la magnitud de los daños experimentados por los ovocitos bovinos bajo altas temperaturas, por lo que usar bajas tensiones de oxígeno podría ser una alternativa para minimizar los efectos adversos del estrés calórico sobre la competencia ovocitaria. En el norte de Uruguay, recolectamos ovarios de vacas de frigorífico durante el verano (diciembre de 2021 y de enero a marzo de 2022) y el invierno (junio a agosto de 2022) y calculamos el índice de temperatura y humedad (ITH) durante todo el tiempo del estudio. Los CCO (complejos cumulus-ovocito) colectados fueron madurados en TCM 199 (Gibco 11150059), y suplementado con FCS (suero fetal bovino), piruvato de sodio, hormona folículo estimulante (FSH), gonadotropina coriónica equina (eCG, v/v) y gentamicina (v/v), durante 24 h un grupo con baja tensión de oxígeno (5% CO2, 5% O2 y 90% N2) y otro con alta tensión de oxígeno (5% CO2, 20% O2 y 75% N2). La selección de espermatozoides se llevó a cabo mediante la técnica de swimup, en el medio TL-FIV + HEPES. Para la FIV los espermatozoides y los CCO se mantuvieron en cultivo durante 22 h, en el medio TL-FIV suplementado con aminoácidos esenciales, aminoácidos no esenciales, hipotaurina y heparina. Los presuntos cigotos (n = 163-206 por grupo) se cultivaron en mSOFaaci con BSA y FCS a 38,5°C, y con las siguientes condiciones atmosféricas 5% CO2, 5% O2 y 90% N2, durante 8 días. En los blastocistos expandidos de cada grupo se determinó el número de blastómeras e índice apoptótico mediante la tinción de TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase fluorescein-dUTP nick-end labeling). Las tasas de división embrionaria y de blastocistos, el número total de células y el índice apoptótico en blastocistos expandidos (n= 8-11 por grupo) obtenidos en invierno y verano bajo ambas tensiones de oxígeno se analizaron mediante un ANOVA de dos vías y la prueba de Tukey. El ITH promedio de verano fue de 72,1, lo que indica un nivel de alerta para las vacas en condiciones de estrés por calor agudo. Los resultados mostraron que la estación y la tensión de oxígeno durante la MIV-FIV afectaron significativamente las tasas de división, de blastocistos y la calidad de los embriones. Los ovocitos recolectados en invierno con 5% de O2 arrojaron los mejores resultados, mientras que los ovocitos recolectados en verano con 20% de O2 durante MIV-FIV arrojaron los peores resultados. Estos hallazgos corroboran que el estrés por calor sumado a la alta tensión de oxígeno tiene un efecto negativo sobre la competencia de desarrollo de los ovocitos bovinos.