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Please use this identifier to cite or link to this item: https://hdl.handle.net/20.500.12008/39880 How to cite
Title: CD38: rol en la electrofisiología cardíaca normal y en arritmias por isquemia y reperfusión
Authors: Peluso, Gonzalo
Obtained title: Magíster en Ciencias Médicas
University or service that grants the title: Universidad de la República (Uruguay). Facultad de Medicina. PROINBIO
Tutor: Contreras, Paola
Type: Tesis de maestría
Descriptors: BIOMARCADORES, ARRITMIAS CARDÍACAS, ISQUEMIA, REPERFUSIÓN, TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO CARDIOVASCULAR, ELECTROFISIOLOGÍA CARDÍACA
Issue Date: 2023
Content: Agradecimientos 2 -- Índice 3 -- Abreviaturas 6 -- Lista de figuras 8 -- Resumen 10 -- Marco teórico 14 -- Anatomía cardíaca y sistema de conducción 14 -- Electrofisiología de las células miocárdicas 16 -- Corrientes iónicas de membrana 16 -- Uniones gap 19 -- Morfología del pa 19 -- Miocardio de trabajo 20 -- Células nodales 22 -- Diferencias entre el potencial de acción humano y murino 24 -- El electrocardiograma (ecg) 25 -- componentes de un trazado normal del ecg 26 -- El calcio en la fisiología miocárdica 27 -- Retículo sarcoplásmico 28 -- Receptor de rianodina 28 -- Liberación de calcio inducida por calcio 28 -- Chispas y ondas de calcio 29 -- proteínas reguladoras del ryr2 29 -- Bomba serca 30 -- Regulación por el sistema nervioso autónomo 31 -- sistema nervioso simpático 31 -- Enfermedad cardiovascular 33 -- Muerte súbita cardíaca (msc) 33 -- Cardiopatía isquémica 33 -- Isquemia aguda y arritmias 33 -- Mecanismo de las arritmias 34 -- Insuficiencia cardíaca y arritmias 35 -- CD38 36 -- Estructura de cd38 37 -- Función de CD38 38 -- ADP ribosil cíclico como producto de CD38 39 -- Antecedentes de CD38 y adprc 40 -- Antecedentes sobre el papel de cd38/adprc fuera del sistema cardiovascular 41 -- Antecedentes del papel de CD38/adprc en el sistema cardiovascular 42 -- Problema de investigación 45 -- Objetivos 47 -- Objetivo general 47 -- Objetivos específicos 47 -- Materiales y métodos 49 -- Modelo biológico 49 -- Registro de la actividad eléctrica cardiaca in vitro 49 -- Eutanasia y disección 49 -- Técnica de Langendorff 49 -- Sistema de registro 51 -- Registro del electromiograma del corazón aislado 51 -- Registro de potencial de acción en corazón entero 52 -- Dispositivo experimental 52 -- Sistema de estimulación 53 -- Blebistatina 53 -- Registro de la actividad eléctrica cardíaca in vivo 54 -- Registro de ratones anestesiados 54 -- Sobre el rol de CD38 en el potencial de acción 57 -- Objetivos (a y b) 58 -- Hipótesis 58 -- Experimento 58 -- Procesamiento de los datos 59 -- Resultados y discusión 60 -- Objetivos (c) 66 -- Hipótesis 66 -- Experimento 66 -- Procesamiento de los datos 67 -- Resultados y discusión 67 -- Sobre el rol de CD38 en la frecuencia cardíaca y la susceptibilidad a arritmias por isquemia y reperfusión in vitro 72 -- Objetivos 73 -- Hipótesis 73 -- Experimento 1 73 -- Procesamiento de los datos 74 -- Resultados y discusión 74 -- Experimento 2 78 -- Procesamiento de los datos 79 -- Resultados y discusión 79 -- Sobre la manifestación electrocardiográfica de CD38 y su rol en modelos de arritmias por isquemia In vivo 85 -- Objetivos 86 -- Hipótesis 86 -- Experimento 86 -- Procesamiento de los datos 87 -- Resultados y discusión 88 -- Conclusiones 99 -- Bibliografía 102
Abstract: Introducción: CD38 es una glicoproteína transmembrana de 300 aminoácidos y 45 kDa expresada de forma ubicua en el organismo que cumple importantes funciones en el metabolismo del cofactor NAD+ y en la regulación del movimiento del calcio celular. Uno de los productos enzimáticos de CD38 es el adenosín difosfato ribosa cíclico o ADP-ribosil cíclico (ADPRc), que actúa como segundo mensajero sensibilizando la liberación de calcio inducida por calcio (CICR por su sigla en inglés). En las últimas 3 décadas se han hecho esfuerzos en la investigación del papel de esta enzima en el sistema cardiovascular, sin embargo aún resta mucho por saber. Antecedentes: Los primeros estudios sobre el papel de CD38/ADPRc a nivel miocárdico mostraron un efecto potenciador del transitorio del calcio por parte del ADPRc. Además se ha descrito un papel arritmogénico utilizando distintas técnicas tanto en modelos reduccionistas como en organismos de mamíferos in vivo. Entre ellos se encuentran modelos de ratones Knock Out para CD38 (CD38KO). La enzima forma parte de la vía de señalización adrenérgica a través de la producción de ADPRc, y se la ha vinculado también a procesos patológicos relacionados con hipertrofia ventricular e isquemia miocárdica. Por ejemplo, la inhibición de la actividad de CD38 protegería al corazón contra la injuria por isquemia y reperfusión (I-R) in vivo e in vitro, disminuyendo el área de infarto. Nuestro grupo ha estado estudiando el rol de CD38 en la actividad cardíaca. Hemos reportado alteraciones en el manejo del Ca++ en miocitos ventriculares aislados de ratones CD38KO, y, en ratones CD38KO in vivo, menor frecuencia cardíaca (FC), marcada variabilidad de la FC, así como menor incidencia de arritmias ventriculares ante un estímulo suprafisiológico de cafeína/adrenalina. No obstante, no se ha investigado su papel en las arritmias por isquemia y reperfusión (I-R) teniendo en cuenta la conocida sobrecarga celular de calcio en este contexto y sabiendo que es la principal causa de muerte súbita en la población general. Tampoco sabemos cómo contribuye a la electrofisiología miocárdica en condiciones fisiológicas, específicamente a la morfología del potencial de acción miocárdico (PA) o a la morfología del trazado electrocardiográfico (ECG). Objetivo: Analizar el papel de CD38 en la actividad eléctrica miocárdica estudiando desde el PA celular hasta el ECG de superficie y su posible impacto en arritmias ventriculares producidas por isquemia y reperfusión. Estrategia: Para el desarrollo de la tesis trabajé con modelos de ratones salvajes (wild type, WT) y CD38KO tanto in vivo como in vitro. Estudié el corazón aislado y perfundido mediante el sistema Langendorff realizando registro extracelular (EMG) e intracelular (potencial de acción, PA). Realicé una caracterización de la morfología del PA midiendo la duración al 30% (APD30) y al 90% (APD90) de la repolarización. Comparé entre las cepas WT y CD38KO con y sin estimulo adrenérgico y en la cepa WT entre estado control y ante la inhibición de CD38 con 78c, un fármaco inhibidor de la actividad enzimática de CD38. Para comparar el potencial arritmogénico de los corazones de ambas cepas a la injuria provocada por I-R registré la actividad eléctrica espontánea mediante EMG, en condiciones basales, durante isquemia global y reperfusión. En el modelo in vivo analicé el ECG de ratones WT y CD38KO anestesiados y comparé la actividad basal y la respuesta arrítmica ante un modelo de infarto de miocardio por sobrecarga adrenérgica con isoproterenol. Resultados y discusión: Describí por primera vez la morfología del PA en la cepa CD38KO y no fue distinta a la de los ratones salvajes en condiciones basales. Esta falta de diferencias podría deberse a compensaciones fisiológicas que ocurren ante la carencia de la enzima como el aumento en la expresión de la bomba SERCA2a. Por lo contrario, cuando sometí el preparado a un desequilibrio homeostático estimulando con un agonista beta adrenérgico, la APD90 de los corazones CD38KO no disminuyó como la de los WT. En concordancia, la inhibición aguda de CD38 en el PA miocárdico de corazones WT perfundidos con 78c aumentó la APD90 significativamente sin cambios en el APD30. Cuando sometí a los corazones CD38KO aislados a un medio arritmogénico con alto contenido de calcio y bajo en potasio, la FC en estos no aumentó a diferencia de lo que ocurrió marcadamente en los WT. La respuesta arrítmica ante la isquemia global en el corazón aislado no fue menor en la cepa CD38KO a diferencia de lo esperado, mostrando una incidencia de 57 % en los WT y 75 % en los CD38KO (valor p = 0.61). En el modelo in vivo describí por primera vez el trazado electrocardiográfico (DII) de animales carentes de CD38. No hubo diferencias en la FC, intervalo PR, intervalo QT, amplitud de onda S, ni amplitud de onda T. Sin embargo la duración del QRS fue menor, mientras que la amplitud de la onda R fue mayor en los ratones CD38KO, probablemente secundario a una mayor velocidad de conducción. Estas diferencias se perdieron en la etapa aguda de la isquemia por sobrecarga adrenérgica. En la cepa CD38KO como era esperado vi mayor proporción de pausas sinusales, que se hicieron más evidentes ante la injuria por isoproterenol, lo que podría estar evidenciando una mayor refractariedad del CICR por disminución del contenido de calcio reticular. No se demostró la protección ante arritmias generadas por isquemia en la cepa CD38KO ya que el incremento de la carga arrítmica fue similar en ambas cepas. No hubo diferencias significativas en la proporción de ratones afectados ni en la suma total de extrasístoles ventriculares registradas pero la mortalidad que generó la sobrecarga adrenérgica en el grupo WT fue de 1/3 mientras que la totalidad de los ratones CD38KO sobrevivieron. Conclusiones: En esta tesis presento una caracterización electrofisiológica de CD38 desde el PA en corazón entero hasta la manifestación electrocardiográfica de superficie, con una evaluación especial de su papel en arritmias por I-R y desarrollando técnicas innovadoras a nivel nacional. Las principales conclusiones son: CD38: rol en la electrofisiología cardíaca normal y en arritmias por isquemia y reperfusión 12 - CD38 contribuye a la repolarización tardía disminuyendo el APD90. - La ausencia de la enzima evita el aumento de la FC en un medio arritmogénico con sobrecarga de Ca++ . - CD38 contribuye con un enlentecimiento en la velocidad de conducción miocárdica manifiesta en un descenso de la duración y aumento del voltaje del QRS en los corazones de ratones que no expresan CD38La deleción de CD38 genera un aumento marcado de pausas sinusales ante la isquemia. - No hay evidencia de una protección ante arritmias malignas por I-R in vitro mediante la deleción de CD38. - No se vio una contribución de CD38 a arritmias malignas por isquemia in vivo aunque la ausencia de la enzima parece mejorar el perfil de supervivencia.
Description: El TFG fue Aprobado con la Nota Muy satisfactorio Escala numérica 11
Publisher: Udelar. FM
Citation: Peluso G. CD38: rol en la electrofisiología cardíaca normal y en arritmias por isquemia y reperfusión [en línea] Tesis de maestría. Montevideo: Udelar. FM, 2023. 109 p.
License: Licencia Creative Commons Atribución - No Comercial - Sin Derivadas (CC - By-NC-ND 4.0)
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