Efecto sobre las características celulares y perfil inmunológico de las células estromales mesenquimales equinas suplementadas con lisado plaquetario

Abstract

Las células estromales mesenquimales (MSC: mesenchymal stromal/stem cells) presentan interés científico debido a los efectos beneficiosos en la regeneración tisular e inmunomodulación. Sin embargo, es necesario expandirlas in vitro utilizando suero fetal bovino (SFB) como suplemento de cultivo. No obstante, el SFB presenta algunas desventajas como la contaminación celular con xenoproteínas y que dado que para su obtención se sacrifican fetos bovinos su producción impacta sobre el bienestar animal. Esté trabajo está enfocado en estudiar el efecto del reemplazo del SFB por el lisado plaquetario (LP) alogénico en el cultivo de MSC derivadas de tejido adiposo equino (eAD-MSC). Para ello, se establecieron 3 condiciones de cultivo para eAD-MSC (n=7) suplementados con 10% de LP alogénico con concentración alta (LPA), concentración media (LPB) y SFB como control. Se determinó la concentración plaquetaria y los factores de crecimiento presentes en los suplementos. Posteriormente, se evaluó la cinética de crecimiento, capacidad clonogénica y tridiferenciación in vitro para las 3 condiciones de cultivo. Además, se inmunofenotipificó las eAD-MSC con el marcador MHC II mediante citometría de flujo (n=7). Por otra parte, se estudió la expresión de estos genes: MHC I, MHC II, IL10, IL6 y TNF-α de las eAD-MSC (n=3) por RT-qPCR. Como resultado, se logró concentrar 5,8 y 3 veces más plaquetas que el valor basal del plasma para LPA y LPB. Se encontró una mayor concentración del factor TGF-β en la formulación LPA en relación a la concentración basal. Con respecto a PDGF-BB los concentrados LPA y LPB presentaron mayor concentración de este factor. La cinética de crecimiento, capacidad clonogénica y multipotencialidad in vitro de las eAD-MSC fue similar para las condiciones de LP en comparación al control. En la inmunotipificación los resultados indican que presentan similar expresión en la superficie celular de MHC II para todas las condiciones. Por otra parte, se pudo observar que las tres condiciones (LPA, LPB y SFB) expresan similares niveles de ARNm de MHC I y MHC II. En relación a genes inmunomoduladores, las tres condiciones expresaron niveles similares de ARNm de IL-6, mientras que los genes TNF- e IL-10 no fueron detectados. Entonces, la formulación de LPB parece ser más conveniente que LPA debido que ante menor concentración plaquetaria se obtiene resultados similares en el cultivo celular y es más eficiente en cuanto a volumen de sangre requerido para su formulación. En suma, este trabajo permitió evaluar el LP cómo reemplazo del SFB para el cultivo de eAD-MSC, no encontrando diferencias entre las condiciones en los parámetros analizados en este trabajo. Por ello, estos resultados nos permiten sugerir que es posible sustituir el SFB con el lisado plaquetario alogénico para expandir las eAD-MSC in vitro ya que conservan sus características celulares e inmunológicas.