En búsqueda de un inductor farmacológico de la dilatación cervical en ovinos : efectos del furoxano, de la carbetocina y del DMSO en el modelo de explantes in vitro

Abstract

La estrechez del cérvix de la oveja limita la inseminación artificial transcervical en esta especie. En la dilatación cervical participan enzimas que degradan la matriz extracelular (metaloproteinasas de la matriz extracelular o MMPs), en especial las MMP-2 y la MMP-9. La actividad de estas enzimas es dependiente de hormonas (estrógenos, oxitocina) y factores inflamatorios (prostaglandina E2, radicales libres), entre otros. La actividad de la MMP-2 aumentó en el sobrenadante de cultivo de explantes de cérvix ovino al estro en presencia de 100 ng/mL de Carbetocina (Cb, análogo sintético de la oxitocina) (Rodríguez Piñón y García-Barcelo 2019).El experimento propone la utilización de dosis crecientes de Furoxano (Fx, productor de óxido nítrico) en DMSO al 2% (pues no es soluble en agua), en presencia de Cb (100 ng/mL) por 12 hs para determinar la actividad enzimática por zimografía de las MMP-2 y MMP-9. Los resultados obtenidos manifestaron que no hubo aumento de la actividad de las MMPs respecto a los controles solo con DMSO, los que mostraron una elevada actividad de la MMP-2.Para obtener evidencias acerca del efecto del DMSO sobre la actividad de las MMP-2 y 9 en explantes de cérvix ovino, decidimos realizar un segundo experimento. Las muestras fueron incubadas en MEM (medio de cultivo, Control) suplementado con: DMSO (2%), DMSO (2%) +Cb (100 ng/mL) y DMSO (2%) + Fx (30 ug/mL) a 37°C por 12 h. En el sobrenadante se midió la actividad de las formas latente (L) y activada (A) de las MMP-2 y MMP-9 por zimografía en gelatina en SDS-PAGE, las que fueron analizadas por ANOVA (MixProc, SAS Institute, USA, 2000), considerando los factores fijos de tratamiento y zona cervical y sus interacciones.La actividad de L y A MMP-9 fue ocasional y esporádica en algunas pocas muestras. Mientras que la actividad de L y A de MMP-2 (ng/mg de tejido, mean±sem) aumentó en presencia de DMSO; y aumentó aún más en presencia de DMSO+Cb. En cambio, cuando la muestra fue expuesta al DMSO+Fx la actividad disminuyó con respecto a la obtenida en el tratamiento solo con DMSO.Los resultados muestran que el DMSO aumenta la liberación de L y A MMP-2 al medio de cultivo, probablemente por alteraciones en la permeabilidad de la membrana plasmática, es el mecanismo propuesto para el DMSO como crio preservante. Además, registramos un efecto aditivo en la asociación DMSO y Cb sobre la actividad de ambas formas de MMP-2, la que no se manifestó al asociar DMSO y Fx.En conclusión, los resultados sugieren que el DMSO podría ser investigado como agente inductor de la dilatación cervical en la oveja.