Estudio de los componentes glucídicos de faciola hepatica y evaluación de su papel en la modulación de la respuesta inmune

Abstract

Los parásitos helmintos expresan diferentes glicoconjugados en su superficie y liberan productos de excreción-secreción ricos en diferentes glicanos que pueden ser muy importantes en su ciclo de vida, infección y patología. Evidencias recientes sugieren que los glicoconjugados de parásitos helmintos podrían desempeñar un papel en la evasión de la respuesta inmune, lo que lleva a una polzarización de las respuestas inmunes hacia un perfil Th2 modificado, que favorece la supervivencia del parásito en el hospedero. Sin embargo, existe poca información sobre la naturaleza o función de glicanos producidos por el trematodo Fasciola hepatica, el agente causante de la fasciolosis en nuestro país. En esta tesis, se investigó si las moléculas glicosiladas de F. hepatica participan en la modulación de la inmunidad del hospedero, enfocándonos en las células dendríticas. Nuestros resultados indican que glycoconjugados de F. hepatica son capaces de promover la producción de IL-4 e IL-10, al igual que suprimir de la producción de IFN . Durante la infección, este parásito es capaz de inducir un fenotipo semi-maduro en células dendríticas que expresan bajos niveles de MHCII y secretan IL-10. Además, se observó que los glicoconjugados parasitarios median la modulación de la maduración de células dendríticas inducida por LPS, ya que su oxidación con m-periodato de sodio restaura la capacidad de las células dendríticas tratadas con LPS para secretar altos niveles de las citoquinas pro-inflamatorias IL-6 e IL-12/23p40 y bajos niveles de la citoquina antiinflamatoria IL-10. Los ensayos de inhibición utilizando carbohidratos sugieren que la modulación inmune está mediada, al menos en parte, por el reconocimiento de CLRs específicos de manosa y mediante la senalización a través de la fosfatasa SHP2. Con el fin de identificar las estructuras glucídicas que median este efecto, se utilizaron glicosidasas específicas específicas ( -manosidasa y -galactosidasa), que fueron inmovilizadas sobre nanopartículas magnéticas. La eficacia de las glicosidasas inmovilizadas se demostró mediante el estudio de la degalactosilación y demanosilación selectiva de glicoproteínas modelo. Por último, la desglicosilación específica de un extracto total del parásito nos permitó mostrar la importancia de glicanos manosilados en la inducción de Th2 durante la infección. Además, se evaluaron las propiedades inmunomoduladoras de los glicanos de F. hepatica sobre células dendríticas humanas, mostrando que éstos son capaces de aumentar la producción de las citoquinas IL-10 e IL-27p28 inducidas por ligandos de TLR. Asimismo, se observó que las propiedades inmunomoduladoras de glicanos están mediadas DC-SIGN, que reconoce glicanos pararasitarios que contienen fucosa y manosa. Por otra parte, los glicoconjugados de F. hepatica inducen a través de DC-SIGN un programa regulador sobre las células dendríticas, capaces de Resumen Página xii disminuir la proliferación de células T alogénicas, lo cual pone de manifiesto el papel de DC-SIGN en la regulación de la respuesta inmune innata y adaptativa por F. hepatica. Por último, se observó que un homólogo murino de DC-SIGN, CD209a, limita la producción de IL-12 por BMDCs pero no influye en su capacidad de estimular linfocitos T CD4+. Por otro lado, se observó un efecto diferente en las células dendríticas cuando se utilizan ligandos parasitarios inmovilizados. Nuestros resultados sugieren que el antígeno Tn expresado en la superficie de F. hepatica puede modular la maduración de las células dendríticas inducida por ligandos de TLR, en un proceso mediado por hMGL, conduciendo a un aumento en la producción de IL-10 y TNF , y a la capacidad de dichas células de polarizar respuestas Th2. Asimismo, se observó que células CD11c+ mMGL2+ F4/80low son reclutadas al peritoneo de ratones infectados, las cuales expresan las citoquinas reguladoras IL-10, TNF y TGF , al igual que una variedad de marcadores asociados a la regulación del sistema inmune y presentan una menor capacidad estimuladora de linfocitos T alogénicos. Los resultados presentados aquí contribuyen a comprender mejor la función de las moléculas glicosiladas de F. hepatica en la modulación de la inmunidad del hospedero y podrían ser útiles en el diseño de vacunas contra la fasciolos