Aislamiento e identificación de Campylobacter fetus por cultivo y real time PCR

Abstract

Gran parte de la economía de nuestro país es está basada en la ganadería y concretamente en la cría vacuna. Históricamente se han registrado porcentajes de preñez que oscilan entre el 65% y 82%. Los factores que influyen en dichos porcentajes son múltiples, pero uno de ellos son las enfermedades de transmisión venérea, como es el caso de la Campilobacteriosis Genital Bovina causada por la bacteria Campylobacter fetus venerealis. Las dificultades en los análisis de laboratorio para el correcto diagnóstico de la enfermedad fue lo que originó este experimento. El objetivo fue comparar dos técnicas de diagnóstico a partir de la misma muestra de esmegma prepucial, la Reacción en Cadena de Polimerasa en Tiempo Real (qPCR) con la técnica de Cultivo y Aislamiento (técnica gold standard), para poder estimar la sensibilidad y especificidad de la qPCR. Se obtuvieron 277 muestras de esmegma prepucial de diferentes toros de descarte enviados a faena en el Frigorífico Schneck, provenientes de 48 establecimientos diferentes. Las muestras fueron analizadas y procesadas siguiendo con todas el mismo protocolo. Se sembraron en medio de cultivo Skirrow y se realizó la qPCR en el la Sección Genética Evolutiva de Facultad de Ciencias dentro de las 6 horas luego de obtenidas en todos los casos. Se obtuvieron 6 cultivos y aislamientos positivos de C. fetus, y 271 cultivos negativos. A su vez, se obtuvieron 7 reacciones de qPCR positivas y 270 reacciones negativas. De los 48 establecimientos de origen, se obtuvieron 5 positivos por cultivo y aislamiento, y 6 positivos a qPCR. La sensibilidad estimada fue de 83,3 % (entre 45,2% y 100%), y la especificidad del 99,3% (entre 98,1% y 100%). El valor de concordancia kappa fue de 0,76 (error estándar de 0,13). Se obtuvo una proporción de 2,2% de toros portadores de C. fetus por cultivo y aislamiento y de 2,5% por qPCR, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas. También se obtuvo una proporción de 10,4% de establecimientos con presencia de C. fetus por cultivo y del 12,5% por qPCR sin encontrar diferencias estadísticamente significativas entre los dos resultados. En conclusión, la qPCR es adecuada como técnica de screening para detectar C. fetus de forma directa del esmegma prepucial, además la bacteria sigue estando presente en Uruguay en establecimientos de diferentes regiones y orientaciones ganaderas.