Vitrificación y trasplante de ovarios de ratón

Abstract

El desarrollo de la ciencia de animales de laboratorio y de la ingeniería genética ha permitido la generación de un creciente número de líneas de ratones y modelos genéticamente modificados. Estos avances han determinado un aumento cuantitativo en el espacio de las instalaciones de animales de laboratorio y un riesgo creciente de perder los valiosos modelos que se van generando. Las técnicas reproductivas permiten el mantenimiento, conservación, transporte y evita los impedimentos éticos que dificultan la permanencia de animales vivos. La aplicación del trasplante de ovario ha sido reportado en varias líneas pero en modelos genéticamente modificados existen pocos estudios. El objetivo de esta investigación fue poner a punto la técnica de trasplante y vitrificación de ovario en un modelo genéticamente modificado, para contribuir a formar un banco genético. Las donadoras de ovarios fueron 20 hembras triple transgénicas, modelo para Enfermedad de Alzheimer < de 10 días de edad. 16 ovarios fueron trasplantados en fresco y 20 ovarios fueron vitrificados para su posterior trasplante. Las receptoras correspondieron al fondo genético de la línea transgénica de 8 a 9 semanas de edad. Se dividieron en 2 grupos al azar, 8 recibieron trasplante de ovarios frescos y 10 vitrificados. Para la cirugía la anestesia administrada fue una combinación de xilacina/acepromacina/ketamina. A los 7 días post cirugía se realizó colpocitología vaginal para determinar actividad ovárica; repitiendo a los 15 y 21 días. Las hembras que presentaron actividad ovárica fueron servidas con machos de la línea triple transgénica. Las hembras que no quedaron preñadas en un plazo de 16 semanas y las que fueron trasplantadas con éxito al final del protocolo fueron sacrificadas por dislocación cervical para la observación de los ovarios y evaluación del trasplante. Se describen: i) las modificaciones realizadas a la técnica quirúrgica; ii) los resultados de las colpocitologías post cirugía; iii) los parámetros reproductivos y iv) los resultados de los análisis genéticos de la descendencia. La actividad ovárica se observó entre 7 y 15 días post cirugía. La tasa de preñez fue de 87,5% en las receptoras de ovarios frescos y 60,0% en ovarios vitrificados. El promedio de días a la 1er camada fue de 38 y 42 en receptoras de ovarios frescos y vitrificados respectivamente. El promedio de crías por camada en las trasplantadas con ovarios frescos fue 4 y 6 en las de ovarios vitrificados. El intervalo de días entre camadas en promedio fue 28 y 34. Todos los parámetros reproductivos no dieron diferencias estadísticamente significativas. Solo las receptoras trasplantadas con ovarios frescos tuvieron descendencia genéticamente modificada. Esta técnica es una herramienta sencilla y de bajo costo para la creación de bancos genéticos que complementa la criopreservación de espermatozoides y el trasplante de embriones. Su aplicación en líneas genéticamente modificadas requiere mayores estudios ya que los resultados dependen de las modificaciones y de los fondos genéticos además del protocolo de elección.