Carcinoma trioideo en caninos : mecanismos moleculares y tratamiento

Abstract

Esta tesis, que se presenta en cuatro artículos, investigó aspectos moleculares del carcinoma tiroideo canino y su tratamiento. En el Artículo I se investigó la expresión de transcriptos determinados por PCR en tiempo real en tiroides sanas, carcinomatosas y en el lóbulo tiroideo contralateral (CL) sano de los perros con cáncer. El grupo carcinoma tuvo una concentración de mRNA menor para Tiroglobulina (Tg) y Tiroperoxidasa (TPO) que el grupo sano y el CL, lo que sugiere que tiene alterada la síntesis de hormonas tiroideas. Las concentraciones de mRNA del receptor de tirotropina (TSH-R), gen pareado box 8 (PAX-8), y receptor de estrógeno alfa (ER?) no fueron diferentes entre grupos. La expresión del TTF-1 y del factor de crecimiento similar a insulina 1 (IGF-I) fue mayor en el grupo CL con respecto a la glándula carcinomatosa, lo que sugiere un mecanismo compensatorio para mantener la condición de eutiroideo en los perros con cáncer. En el Artículo II se determinó la inmunotinción de TSH-R, Tg, TTF-1, antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA), factor de crecimiento vascular (VEGF) y de crecimiento fibroblástico 2 (FGF-2) en glándulas tiroideas sanas y carcinomatosas. El número de folículos fue menor y la densidad celular y número de vasos sanguíneos fue mayor en glándulas carcinomatosas respecto las sanas. No se encontraron diferencias en la inmunotinción de TSH-R y Tg entre grupos en células foliculares y fibroblastos. Las células foliculares carcinomatosas presentaron 2 y 3 veces más intensidad de tinción de TTF-1 y PCNA respectivamente respecto las sanas. La tinción de VEGF en células endoteliales fue mayor en los carcinomas. La mayor expresión de proteínas relacionadas a la proliferación y angiogénesis (TTF-1, PCNA y VEGF) encontrada en el carcinoma es consistente con los mecanismos de progresión tumoral. El objetivo del Artículo III fue determinar si marcadores como VEGF, FGF-2, IGF-1 y su receptor (IGF-1R) así como los receptores de ácido retinoico (RAR? y RXR) se asociaban con un patrón histológico diferencial (folicular compacto vs compacto vs sanos). La expresión de IGF-I, IGF-1R y VEGF en fibroblastos y células endoteliales fue mayor en carcinomas compactos que tejido sano y se encontró una mayor expresión de IGF-1R en fibroblastos y FGF-2 en células endoteliales del carcinoma compacto respecto de los foliculares-compactos. La mayor expresión de factores vinculados a la oncogénesis en células endoteliales y fibroblastos encontrada en los carcinomas compactos sostiene la relevancia de las células estromales en la generación del tumor. En el Artículo IV se evaluó el efecto de isotretinoína 9-cis (AR9-cis) sobre la recurrencia tumoral y sobrevida como tratamiento novedoso frente al tradicional (doxorrubicina) en el carcinoma tiroideo post cirugía, incluyendo un grupo control (sin tratamiento). El tipo de carcinoma afectó el tiempo de recurrencia y el de sobrevida, siendo mayor en los carcinomas foliculares respecto de los carcinomas foliculares-compactos, que a su vez fueron mayores que los carcinomas compactos. Existió una interacción entre el tratamiento y el tipo de carcinoma, ya que no se encontró efecto del tratamiento en los carcinomas foliculares, mientras que en los otros tipos de carcinoma, los perros tratados con AR9-cis presentaron mayor tiempo de recurrencia y sobrevida, indicando que este tratamiento utilizado luego de la cirugía es superior al tratamiento tradicional con doxorrubicina.

This thesis presented in four articles, investigated the molecular basis of thyroid carcinoma in dogs and its treatment. In Article I, transcript expression was determined by real time PCR in healthy thyroid glands, carcinomas and in the healthy contra lateral lobe (CL) of dogs with cancer. Thyroglobulin (Tg), and thyroperoxidase (TPO) mRNA expression in carcinoma glands was lower than in healthy glands, suggesting an altered capacity to synthesize thyroid hormones. Concentrations of thyrotropin receptor (TSH-R), paired box 8 transcription factor (PAX-8), and estrogen receptor alpha (ERα) mRNA were not different between groups. The expression of thyroid specific transcription factor-1 (TTF-1) and insulin like growth factor (IGF-I) was greater in the CL group than in carcinoma group, suggesting that the CL lobe may function in a compensatory state. In Article II, the average immmunostaining of TSH-R, Tg, TTF-1, vascular endothelial growth factor (VEGF), fibroblastic growth factor-2 (FGF-2) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) were determined in follicular carcinomas and healthy thyroid canine glands. The number of follicles was lower, while cell density and number of blood vessels were greater in thyroid carcinomas than in healthy thyroid glands. No differences were detected in the intensity of staining of TSH-R and Tg in follicular cells and fibroblasts between healthy and carcinomas tissue. Follicular cells of the carcinoma tissue presented 2 to 3-fold greater staining of TTF-1 and PCNA respectively than cells of healthy thyroid tissue. VEGF staining was stronger in endothelial cells of the tumoral tissue when compared with normal thyroid tissue, but no differences were found in the other cell types. The greater protein expression of factors related to proliferation and angiogenesis (TTF-1, PCNA and VEGF) found in the carcinoma glands respect healthy thyroid tissue, is consistent with the mechanisms of tumor progression. The objective of Article III was to determine if markers like VEGF, FGF-2, IGF-1 and its receptor (IGF-1R) and retinoic receptors (RARα and RXR) were associated with the tumor histological type (compact carcinomas vs follicular-compact vs healthy thyroid glands). IGF-I, IGF-1R and VEGF expression was greater in fibroblasts and endothelial cells of compact carcinoma than healthy glands. IGF-1R expression in fibroblasts and FGF-2 expression in endothelial cells of compact carcinoma were greater than follicular-compact carcinoma. The greater expression of factors related to proliferation and angiogenesis in endothelial cells and/or fibroblasts of compact carcinoma when compared to healthy glands supports the relevance of stromal cells on oncogenesis. In Article IV, the effects of isotretinoína 9-cis (AR9-cis) as a novel post surgery treatment of thyroid carcinoma when compared to a traditional treatment (doxorubicin) was investigated and a control untreated group was included. The time to recurrence was significantly shorter in the control group and doxorubicin group vs AR9-cis group, while no differences were found among doxorubicin and control groups. The type of carcinoma affected time of recurrence and survival as follicular carcinomas presented a greater times than follicular-compact carcinomas which in turn presented greater survival time than compact carcinomas. The interaction among treatment and type was significant as recurrence and survival times in follicular carcinomas did not differ between treatments, but AR9-cis dogs had greater times in follicular-compact and compact carcinomas, showing that this treatment is superior to the traditional (doxorubicin).