Producción del antígeno recombinante Ct-RAP-1 de Babesia bovis como potencial plataforma diagnóstica de la babesiosis bovina en Uruguay

Abstract

Babesia bovis es un protozoario hemoparásito transmitido por la garrapata Rhipicephalus microplus, agente causal de la babesiosis bovina, una enfermedad de elevada letalidad que genera importantes pérdidas económicas en los sistemas ganaderos. En Uruguay, la expansión geográfica de la garrapata ha favorecido el incremento de la incidencia de la enfermedad, estimándose pérdidas cercanas a los 15 millones de dólares anuales. La vigilancia epidemiológica constituye una herramienta clave para su control; sin embargo, las metodologías diagnósticas disponibles presentan limitaciones. La microscopía posee baja sensibilidad en infecciones con escasa parasitemia, mientras que la inmunofluorescencia indirecta (IFI), considerada la técnica serológica de referencia, presenta baja capacidad de procesamiento, dependencia del operador y potencial reactividad cruzada con B. bigemina. En este contexto, el desarrollo de ensayos ELISA basados en antígenos recombinantes representa una alternativa promisoria para mejorar el diagnóstico de la enfermedad. El objetivo de esta tesina fue producir de forma recombinante el extremo C-terminal de la proteína asociada a la roptria 1 de B. bovis (rCt-RAP-1_Bbo) y evaluar preliminarmente su potencial aplicación como antígeno en un ELISA indirecto. RAP-1 participa en la invasión eritrocitaria y su región C-terminal se caracteriza por presentar secuencias conservadas, epítopos inmunodominantes y baja reactividad cruzada con otras especies de Babesia. Para ello, el gen sintético correspondiente fue clonado en el vector pET-15b, expresado en Escherichia coli BL21(DE3) y purificado mediante cromatografía de afinidad a níquel. La antigenicidad de la proteína recombinante se evaluó mediante Western blot utilizando sueros bovinos positivos para B. bovis, observándose el reconocimiento específico de una banda de aproximadamente 30 kDa. Asimismo, se analizó su desempeño en un ELISA indirecto desarrollado en el marco del proyecto de investigación en el que se inserta esta tesina, empleando una seroteca compuesta por animales con estatus sanitario previamente caracterizado. Los resultados obtenidos sugieren que rCt-RAP-1_Bbo tendría la capacidad para discriminar entre animales seropositivos y seronegativos para B. bovis, sin evidenciar reactividad cruzada frente a sueros positivos para B. bigemina ni Anaplasma marginale. En conclusión, se logró producir y purificar exitosamente el antígeno recombinante rCt-RAP-1_Bbo y demostrar su capacidad para ser reconocido específicamente por anticuerpos dirigidos contra B. bovis. Estos resultados respaldan su potencial aplicación como antígeno sensibilizante en ensayos ELISA para el diagnóstico serológico de la babesiosis bovina. Como perspectivas, se propone ampliar la evaluación utilizando un mayor número de muestras para determinar la sensibilidad y especificidad diagnóstica del ensayo y avanzar hacia la validación de una herramienta serológica adaptada a las necesidades sanitarias de Uruguay.