Caracterización de marcas de ɣH2AX y su relación con la replicación del ADN en cromosomas mitóticos de CHO9

Abstract

La histona no-canónica H2AX, ante la ocurrencia de daño generado por estrés oxidativo endógeno, radiación ionizante o ciertas drogas, se fosforila en S139, un evento temprano en la respuesta celular al daño en el ADN, que resulta en la formación ɣH2AX. Continuando con estudios del Laboratorio de Genética del IIBCE, nuestro objetivo fue averiguar si los foci de ɣH2AX se ubicaban preferentemente en las regiones replicantes de los cromosomas mitóticos, dañados en fase S temprana y media, de cultivos de CHO9. Sin embargo, la presencia inesperada de abundantes marcas de ɣH2AX en los grupos control nos llevó a proponernos un segundo objetivo que fue la caracterización morfológica de dichas marcas. Así que indujimos el daño con Bleomicina, un radiomimético, y marcamos a ɣH2AX con un anticuerpo fluorescente y a las zonas replicantes con EdU, un análogo de la timidina, que se incorpora durante el ciclo celular, evidenciando regiones replicantes mediante fluorescencia. De esta manera, mediante inmunomarcación de ɣH2AX, detección química de EdU y contratinción con DAPI detectamos las marcas de ɣH2AX, la región replicante y los cromosomas, respectivamente, tomando imágenes de microscopía confocal. Concluimos que, en efecto, las marcas más intensas y las de intensidad media, atribuidas a daño genético, colocalizan con las regiones replicantes, mientras que las marcas débiles, no relacionadas con el daño, no.