Estudio preliminar sobre el papel de la MMP9 en el cáncer de mama triple negativo

Abstract

En la actualidad el cáncer representa una de las principales causas de muerte tanto en Uruguay como a nivel mundial. En particular, el cáncer de mama constituye el tipo de cáncer más frecuente a nivel global. El entendimiento de la respuesta inmune anti-tumoral asociado al conocimiento de la biología molecular de la célula tumoral, han colocado a la inmunoterapia como primera opción en el tratamiento en diferentes tipos de cáncer. Por dicho motivo, la comprensión de los mecanismos por los cuales las células tumorales adquieren mayor malignidad y modulan la respuesta inmune es relevante para poder continuar desarrollando nuevas estrategias terapéuticas contra el cáncer. La presencia del glicoantígeno Tn (Ser/Thr-GalNAc), producto de una O-glicosilación incompleta, en las células tumorales se correlaciona con una mayor agresividad tumoral, desarrollo de metástasis y evasión del sistema inmune. Los antecedentes de este trabajo sugieren que la presencia del antígeno Tn en las células tumorales de mama podría estar favoreciendo una expresión aumentada de la Metaloproteasa 9 de Matriz (MMP9). La MMP9 es una proteína O-glicosilada involucrada en la remodelación de la matriz extracelular, en procesos de invasividad tumoral y en el desarrollo de metástasis. El presente trabajo buscó evaluar si los niveles de MMP9 se encuentran asociados con la agresividad tumoral, así como con la respuesta inmune anti-tumoral en un modelo de cáncer de mama murino con O-glicosilación truncada (Tn+). Para poder evaluar el papel de la MMP9 en el contexto tumoral, se generaron dos subclones con el gen Mmp9 potencialmente mutado (Tn+/A3 y Tn+/C12) utilizando la tecnología CRISPR/Cas9, derivados del clon parental (4T1-Tn+). Al ser inoculados en ratones, ambos clones desarrollaron tumores que presentaron una fuerte reducción en el crecimiento tumoral, en relación al clon parental Tn+. También se obtuvo un menor desarrollo de micrometástasis a nivel pulmonar en aquellos ratones inoculados con las células tumorales Tn+/A3 y Tn+/C12. Adicionalmente, se evaluó el microambiente inmune a nivel tumoral, donde se constató cambios en poblaciones inmunes presentadoras de antígeno, así como en poblaciones linfocitarias reguladoras. Particularmente, se observó un aumento de células mieloides presentadoras de antígeno, así como de su expresión de MHCII en ratones portadores de tumores Tn+/A3 y Tn+/C12, en relación a aquellos portadores de tumores Tn+. A su vez, se obtuvo una disminución en la frecuencia de linfocitos T CD4+ Foxp3+ y T CD4+ IL-10+, así como en la expresión de Foxp3 e IL-10, dentro de la población T CD4+ en ausencia de MMP9 en las células tumorales. Por otro lado, se abordó el estudio de la respuesta inmune a nivel sistémico. Al evaluar la composición leucocitaria en sangre de ratones portadores de tumor, se observó una disminución de la proporción entre neutrófilos y linfocitos circulantes en los ratones con tumores derivados de los clones Tn+/A3 y Tn+/C12. Además, se evaluó la capacidad de esplenocitos derivados de ratones portadores de tumor de producir diferentes citoquinas, ante un estímulo policlonal de linfocitos T, donde se detectó un aumento en la producción de citoquinas a nivel del bazo, para los ratones con tumores derivados de los clones seleccionados. En suma, los resultados obtenidos resaltan el papel de la MMP9 con O-glicosilación incompleta en el desarrollo tumoral, así como en el desarrollo de metástasis. A su vez, el trabajo realizado permite profundizar en el vínculo entre la respuesta inmune anti-tumoral y los diferentes parámetros clinicopatológicos, contribuyendo así al eventual desarrollo de futuras inmunoterapias dirigidas.