Implementación de una técnica de RT-qPCR con sonda TaqMan para la detección de PRRSV a partir de diferentes matrices

Abstract

El síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRS), causado por el virus del PRRS (PRRSV), es una enfermedad de gran importancia económica que ha impactado significativamente en la producción porcina a nivel mundial durante más de tres décadas. En Uruguay, el virus fue reportado por primera vez en un estudio realizado en la Sección Virología de Facultad de Ciencias y publicado en 2018, donde se evidenció que PRRSV-2 circulaba en el país desde al menos el año 2011. Este hallazgo generó una alerta sanitaria y despertó un interés significativo en comprender el escenario epidemiológico regional y desarrollar herramientas para el monitoreo del estatus sanitario de PRRSV-2 en el país. En el presente trabajo, el objetivo principal fue implementar una técnica de RT-qPCR con sonda TaqMan para la detección de PRRSV en Uruguay. Hasta el momento para estudiar la circulación de este virus, ha sido utilizada en nuestro laboratorio la técnica RT-Nested PCR, que si bien es una herramienta sensible, es laboriosa y consume mucho tiempo. La puesta a punto de la RT-qPCR implicó el diseño adecuado de los cebadores y la sonda, utilizando como controles positivos muestras de ARN identificadas previamente como positivas por nuestro grupo de investigación. Esto nos ha proporcionado una herramienta adicional, sensible y rápida para la detección de PRRSV en diversas muestras biológicas. La implementación de la técnica de RT-qPCR en diferentes matrices ha desprendido resultados alentadores, demostrando sobre todo que es una buena herramienta de detección molecular del virus en muestras de saliva. Esto será de gran utilidad para futuros estudios epidemiológicos y para el monitoreo viral en granjas. Por otro lado, en este trabajo se realizó por primera vez la detección molecular, no solo en saliva de cerdo, sino también en muestras de jabalíes de nuestro país. Además, la obtención de secuencias del virus a partir de estas muestras, ha proporcionado información sobre la especie y el potencial linaje al que pertenecen los virus identificados. Los resultados obtenidos subrayan la importancia de monitorear el virus y conocer sus características genéticas, tanto en la población salvaje como doméstica, para establecer una adecuada estrategia de control y prevención.