Vesículas extracelulares de células de melanoma senescentes: búsqueda de componentes mitocondriales y efecto del silenciamiento de la mitofusina 1

Abstract

Las células senescentes son células no proliferativas que secretan un conjunto diverso de biomoléculas capaces de modular su microambiente. Este secretoma incluye proteínas, lípidos, ácidos nucleicos y vesículas extracelulares. Las vesículas extracelulares, estructuras rodeadas por una membrana lipídica y de tamaños que abarcan desde decenas hasta cientos de nanómetros, participan en procesos fisiológicos y patológicos como la inflamación, la respuesta inmune y la progresión tumoral. En el contexto del cáncer, las vesículas secretadas por células senescentes pueden influir en la respuesta al tratamiento. El objetivo principal de este proyecto fue estudiar las vesículas secretadas por células de melanoma senescentes y evaluar el impacto del silenciamiento de mitofusina 1 en este proceso. Para ello, se indujo senescencia mediante exposición a temozolomida y se aislaron fracciones enriquecidas en vesículas extracelulares mediante cromatografía de exclusión molecular. Se analizaron los marcadores vesiculares ALIX, TSG-101 y CD81, y se cuantificaron partículas mediante análisis de pulsos resistivos para determinar su cantidad y tamaño. Nuestros resultados muestran que la senescencia inducida por temozolomida aumenta la secreción de vesículas en células de melanoma. Además, se detectaron componentes mitocondriales (succinato deshidrogenasa y ADN mitocondrial) en las vesículas derivadas tanto de células control como senescentes. En particular, las vesículas de células senescentes presentaron un marcado aumento en el número de copias de ADN mitocondrial. Por otro lado, el silenciamiento de mitofusina 1 no modificó significativamente la cantidad total de vesículas extracelulares secretadas, pero alteró los niveles de ALIX, un marcador asociado a exosomas. Esto sugiere que la dinámica mitocondrial podría regular de forma selectiva determinadas rutas de biogénesis o de liberación de vesículas en células senescentes. Estos resultados aportan información sobre el contenido de las vesículas extracelulares de las células de melanoma y melanoma senescentes; y sobre la influencia de proteínas involucradas en la dinámica mitocondrial. En suma, sugieren que la senescencia inducida por quimioterapia modifica tanto la cantidad como la composición de las vesículas secretadas por células de melanoma.