Evaluación de la presencia de microorganismos en la orina de personas sanas y con patología urinaria mediante diferentes técnicas de cultivo

Abstract

La microbiota es el conjunto de microorganismos que residen en un ambiente determinado. La microbiota urinaria fue descubierta en 2012, desafiando el concepto de que la orina vesical es estéril. Esta microbiota difiere entre mujeres y varones en composición y complejidad. Puede influir en enfermedades urológicas y modular la respuesta inmune. La infección del tracto urinario (ITU) se define como la presencia de patógenos en el tracto urinario en pacientes con síntomas compatibles. Es más común en mujeres y E. coli es el patógeno más frecuente. Concomitantemente, se ha reportado la presencia de comunidades bacterianas intracelulares, generalmente asociadas a personas con infección urinaria recurrente. Las bacterias permanecen dentro de las células escapando así a: la detección por el urocultivo, la acción de los antimicrobianos y al sistema inmune. El presente trabajo tiene como objetivo general estudiar la microbiota asociada al tracto urinario en personas sanas y en pacientes con síntomas urinarios e investigar bacterias intracelulares en las células uroepiteliales de descamación de la vejiga. Ciento cuarenta y un individuos fueron incluidos en el estudio, 72 asintomáticos y 69 sintomáticos. De los mismos, 91 eran adultos (46 mujeres y 45 varones) y 50 pediátricos -menores a 15 años- (31 niñas y 19 varones). La muestra de orina se recolectó por la técnica de chorro medio. Las muestras de orina se cultivaron con distintas metodologías (urocultivo estándar-UE- y urocultivo expandido-EQUC-) para evaluar la presencia de bacterias cultivables y su posterior identificación por MALDI-TOF. La presencia de bacterias intracelulares fue evaluada mediante citocentrifugación, tinción clásica de May-Grunwald Giemsa y de fluorescencia para la visualización mediante microscopía láser confocal. Se identificaron 66 especies bacterianas distintas en el total de los aislamientos, siendo los géneros-especies más frecuentes: Staphylococcus spp, E. coli, E. faecalis. En individuos asintomáticos predominó Staphylococcus spp y en sintomáticos, E. coli y Klebsiella spp. En mujeres predominó E. coli y en varones, Staphylococcus spp y E. faecalis. EQUC demostró ser más efectivo en la detección de microorganismos que UE para conocer la microbiota urinaria, especialmente en varones adultos y en individuos asintomáticos. Se detectaron bacterias intracelulares en 51% de las muestras y su asociación con síntomas clínicos fue significativa en mujeres. Este estudio revela una riqueza de bacterias capaces de invadir las células del tracto urinario, con algunas asociaciones significativas entre especies bacterianas específicas (E.coli y Staphylococcus spp) y la presencia o ausencia de síntomas. En conclusión, el aparato urinario bajo está habitado por una microbiota propia, derribando el mito de que es estéril. Algunos pacientes presentan además, bacterias intracelulares no detectables por métodos diagnósticos clásicos y protegidas del efecto de los antimicrobianos, que podrían explicar la sintomatología en pacientes con patologías crónicas de etiología incierta. Se sugiere el uso de EQUC para investigar la microbiota urinaria, la necesidad de estudios prospectivos y el uso de métodos de secuenciación del gen ARNr 16S para comprender mejor el urobioma y desarrollar nuevas estrategias preventivas y terapéuticas.