Producción recombinante de fragmentos derivados del receptor linfocitario CD6 y exploración de su potencial valor inmunoterapéutico

Abstract

El receptor scavenger transmembrana de tipo I CD6 se expresa principalmente en poblaciones linfocitarias T y B1a, y está compuesto por tres dominios SRCR (scavenger receptor cysteine-rich) en tándem; siendo CD6.D1 el dominio distal y CD6.D3 el dominio proximal. Dicho receptor ha cobrado gran relevancia en los últimos años dado que (i) reconoce una amplia gama de patrones moleculares asociados a patógenos, (ii) algunos de sus ligandos endógenos se encuentran sobre-expresados en diversos cánceres, (iii) ciertos polimorfismos de CD6 se asocian fuertemente al desarrollo de distintas enfermedades autoinmunes, y (iv) el uso de ratones knock out para CD6 ha mostrado fenotipos protectores en modelos de enfermedades inmunomediadas y/u oncológicas. En este contexto, se han desarrollado múltiples estrategias inmunoterapéuticas dirigidas a modular sus funciones, dentro de las cuales destacan los anticuerpos monoclonales enfocados en la eliminación directa de células blanco CD6+ a través de mecanismos de citotoxicidad mediada por anticuerpos o mediante modulación de sus funciones inmunoreguladoras. Asimismo, con el objetivo de bloquear la interacción entre los ligandos de CD6 y el receptor expresado en la membrana celular linfocitaria se ha explorado el uso del ectodominio recombinante soluble de CD6, y de péptidos derivados de su secuencia, en estrategias de tipo decoy o señuelo; las cuales han mostrado importantes niveles de eficacia en modelos murinos de enfermedades infecciosas, cáncer y enfermedades autoinmunes. En este sentido, cabe destacar que los ligandos endógenos de CD6 más relevantes en el desarrollo de dichas patologías, ALCAM y CD318, interaccionan con los dominios CD6.D1 y CD6.D3, respectivamente. Por ello, en el presente trabajo se generaron proteínas recombinantes correspondientes a ambos dominios, tanto en forma monomérica como dimérica a través de su fusión al fragmento Fc de IgG1 humana. Las proteínas recombinantes se produjeron eficientemente en células de mamíferos HEK293-T y se caracterizaron tanto estructuralmente como funcionalmente en términos de su capacidad de interactuar con motivos bacterianos. Asimismo, se evaluó la capacidad de los recombinantes de inducir respuestas humorales no convencionales en llama inmunizadas con los mismos, abriendo un gran abanico de posibilidades para el desarrollo futuro de nanobodies específicos potencialmente útiles en inmunoterapias.