Caracterización del perfil de vesículas extracelulares producido por una línea celular trofoblástica (Swan-71) en respuesta a diversos estímulos inflamatorios

Abstract

Las vesículas extracelulares (VEs) son estructuras delimitadas por membranas lipídicas liberadas por las células como parte de sus mecanismos de comunicación intercelular, con capacidad para modular procesos fisiológicos o patológicos en células receptoras. Su biogénesis y composición molecular determinan estos efectos y dependen del estado de la célula de origen. Durante el embarazo, la comunicación intercelular es clave para sostener procesos complejos como el establecimiento de la interfaz materno-fetal y la regulación del sistema inmune materno. En este contexto, el trofoblasto (tejido embrionario en estrecho contacto con células maternas) libera VEs que median el diálogo materno-fetal, modulando respuestas tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. Actualmente, la información disponible acerca de VEs trofoblásticas en contextos de infección es limitada, y no se han reportado estudios que evalúan su perfil ante la exposición de Toxoplasma gondii, patógeno causante de la toxoplasmosis, la segunda infección intrauterina más frecuente. En este sentido, el objetivo de este trabajo es establecer condiciones experimentales para el estudio in vitro del perfil de VEs producido por la línea celular trofoblástica de primer trimestre Swan-71, en respuesta a estímulos inflamatorios de distinta naturaleza: TNF-⍺ como modelo de estímulo proinflamatorio general y antígenos solubles de Toxoplasma gondii como modelo de estímulo infeccioso. Para esto, se optimizaron las condiciones de cultivo para la obtención de VEs, y los parámetros para el análisis de estas mediante rastreo de nanopartículas (NTA, ViewSizer 3000). Además, para monitorear el estado del cultivo, se implementaron ensayos de viabilidad celular y, en ciertos casos, se evaluó la liberación de citoquinas. Los resultados obtenidos permitieron estandarizar un sistema experimental definido para el análisis de VEs liberadas por Swan-71. Se obtuvieron condiciones de análisis por NTA que permitieron una caracterización consistente, se validaron ensayos para el monitoreo de la actividad celular, y se definieron condiciones de cultivo que aseguraron la adecuada obtención de VEs para su evaluación. Bajo estas condiciones definidas, se logró por primera vez caracterizar el perfil basal de VEs liberado por Swan-71 mediante NTA, obteniéndose distribuciones de tamaño consistentes con lo reportado para células trofoblásticas. Frente a TNF-⍺ y antígenos solubles de T. gondii, se indujeron respuestas celulares detectables (disminución moderada de la actividad metabólica y aumento en la liberación de IL-6, respectivamente), sin afectar significativamente la viabilidad del cultivo ni el perfil de VEs liberadas. En conjunto, este trabajo establece un sistema reproducible para el estudio por NTA de VEs liberadas por la línea celular Swan-71, permitiendo caracterizar su perfil vesicular basal y constituyendo un punto de partida para la investigación del rol de estas VEs durante la inflamación y la infección.