Herramientas basadas en Lectinas y su contribución al diagnóstico de enfermedades congénitas de glicosilación en neonatos

Abstract

Las alteraciones congénitas de la glicosilación (CDG) son enfermedades genéticas raras causadas por defectos en la síntesis o procesamiento de glicanos lo que genera glicoproteínas anómalas y afecta múltiples funciones celulares. Su diagnóstico suele ser complejo por la variabilidad clínica y la superposición de síntomas con otras patologías. En este contexto, las lectinas, proteínas que interaccionan en forma específica y reversible con carbohidratos, surgen como herramientas prometedoras para detectar alteraciones en la glicosilación. Esta tesina tuvo como objetivo desarrollar un ensayo bioquímico tipo ELLA basado en el uso de lectinas vegetales para detectar patrones anómalos de glicosilación en transferrina humana, una glicoproteína utilizada como biomarcador diagnóstico en CDG. Se seleccionaron 6 lectinas vegetales de origen comercial y una lectina purificada en el laboratorio a partir de semillas de Erythrina crista-galli var. hasskarlii (ceibo rojo) y se usaron en forma biotinilizada. Se generaron diferentes glicoisoformas de transferrina humana recombinante mediante desialilación química y posterior degalactosilación enzimática. Estas isoformas sirvieron luego como modelos para evaluar la capacidad de reconocimiento diferencial por parte de las lectinas seleccionadas. Se diseñó y optimizó un ELLA utilizando las lectinas biotiniladas, con detección mediante estreptavidina-peroxidasa y revelado con reactivo TMB. Se ensayaron distintas condiciones experimentales y se observó un reconocimiento diferencial de las lectinas frente a las distintas isoformas de transferrina generadas. Los resultados obtenidos demostraron que el ensayo ELLA optimizado permite distinguir entre isoformas con distintos grados de glicosilación, en función de la especificidad de cada lectina. Este enfoque representa una alternativa accesible y sensible para complementar el diagnóstico de CDG, y aporta una herramienta potencial para su implementación en contextos clínicos.