¿Es capaz el dominio C-terminal de UreA de aumentar la endocitosis de AzgA?

Abstract

Un aspecto importante del mantenimiento de la homeostasis celular y las respuestas al estrés es la regulación de la composición del repertorio de transportadores en la membrana plasmática, siendo estos responsables de la absorción y exportación de nutrientes, así como de otras moléculas pequeñas no permeables. Los mecanismos generales que controlan este proceso están altamente conservados entre los organismos eucariotas e involucran tanto la regulación transcripcional como la regulación del tráfico intracelular a través de la modulación del equilibrio de secreción, reciclaje y degradación de transportadores en respuesta a cambios en el entorno extracelular. Uno de los mecanismos más importantes de regulación comprende la remoción selectiva de transportadores de membrana, mediante un proceso de endocitosis que deriva en una posterior degradación. En este trabajo pretendemos aportar al conocimiento de los mecanismos que subyacen a este proceso, utilizando como modelo UreA, el transportador de alta afinidad por la urea de Aspergillus nidulans, el cuál es endocitado para su degradación en respuesta a la adición de amonio en el medio de cultivo (endocitosis mediada por amonio). El equipo de investigación en donde se llevó a cabo este trabajo identificó tanto elementos en trans (e.g., ubiquitin-ligasa HulA y un adaptador para esta, ArtA), como elementos en cis (lisinas candidatas a ser ubiquitinadas y un parche acídico de potencial interacción con ArtA) presentes en el dominio C-terminal del transportador, que están involucrados en su endocitosis. Con respecto al posible sitio de unión a la arrestina ArtA, no se puede descartar que la secuencia identificada pueda formar parte de un motivo tridimensional, que interactúe con otras partes de la molécula de UreA. Dado que AzgA, el transportador de adenina/hipoxantina de A. nidulans, es prácticamente insensible a la endocitosis mediada por amonio, en este trabajo se buscó determinar si el añadido del dominio C-terminal de UreA es capaz de aumentar la endocitosis de AzgA en presencia de este estímulo endocítico. Mediante la generación, expresión funcional en A. nidulans y posterior análisis de la quimera AzgA-Ct.UreA-GFP, se logró responder afirmativamente a la pregunta que da lugar el título de esta tesina, aportando una nueva evidencia que respalda la importancia y funcionalidad de los extremos terminales citosólicos de los transportadores eucariotas.