Clonado, expresión y evaluación preliminar de la inmunogenicidad de antígenos de ORF2 del virus de la hepatitis E (HEV)

Abstract

El virus de la hepatitis E (HEV) está actualmente catalogado como una importante causa de hepatitis viral aguda en el mundo. Anualmente se estiman unos 20 millones de casos sintomáticos, lo cual seguramente sea una subestimación debido a la elevada tasa de infección asintomática y la ausencia de métodos de diagnóstico disponibles en ciertos contextos de elevada incidencia. Epidemias de HEV se han registrado en países de bajos ingresos o en desarrollo donde la infección es endémica, mientras que casos autóctonos y esporádicos han sido documentados en naciones industrializadas. La infección por HEV suele ser autolimitada, con una tasa de letalidad <4%, sin embargo, en personas embarazadas, la letalidad puede ser tan elevada como un 30% aproximadamente y recientes reportes sugieren que la infección por HEV puede cronificarse en pacientes con algún nivel de inmunocompromiso, causando un amplio abanico de manifestaciones extrahepáticas. Por estas razones, desde hace unos años se considera a HEV como una amenaza emergente y desatendida para la salud pública. El género Paslahepevirus de HEV, incluye ocho genotipos de los cuales HEV-1, HEV- 2, HEV-3 y HEV-4 son capaces de infectar humanos. Los genotipos antropotrópicos HEV-1 y HEV-2, son transmitidos principalmente a través del agua contaminada con materia fecal (waterborne); mientras que para los genotipos HEV-3 y HEV-4 la vía principal de transmisión es zoonótica. No existe un tratamiento recomendado para infecciones de HEV aguda, excepto en pacientes de riesgo con hepatitis severa, para lo cual está aprobado el uso de Ribavirina. Hasta la fecha, la única vacuna disponible en el mercado, es HecolinTM desarrollada por Xiamen Innovax Biotech, con fase III de ensayos clínicos completa, licenciada para uso comercial en China y recientemente también en Pakistán. Dado que la proteína de cápside (ORF2) comparte más del 85% de identidad en los 4 genotipos capaces de infectar humanos, el HEV se presenta como un único serotipo y por tanto ORF2 es un buen candidato como vacuna de subunidades de HEV al proteger de forma cruzada entre genotipos. En este trabajo nos propusimos diseñar diferentes estrategias para la producción de VLPs de HEV-3, utilizando diferentes antígenos de ORF2 y las características biológicas de la proteína Z del virus Junín, capaz de generar vesículas extracelulares. Partiendo de esta base, hipotetizamos que es posible desarrollar sistemas de expresión de antígenos que potencialmente pudieran ser utilizados en estrategias de inmunoprevención o diagnóstico. Se lograron poner a punto nuevas metodologías para el laboratorio, además de trabajar con técnicas de diseño y expresión de proteínas recombinantes que estaban desarrollándose en la región y de las cuales no había casi antecedentes, apostando por una tecnología nueva de producción de antígenos.