Estudio de la localización subcelular de diferentes construcciones de PIWIL1 en línea celular de cáncer de colon

Abstract

Recientemente, se ha reportado que las proteínas PIWI, especialmente PIWIL1, constituyen una vía no caracterizada previamente en el proceso oncogénico capaz de regular el ciclo celular de la célula tumoral. Esto provoca que resulte muy novedoso determinar cuáles son los mecanismos por los cuales PIWIL1 actúa ya que estos pueden significar la generación de nuevos biomarcadores diagnósticos y/o blancos terapéuticos en cáncer. Aún queda mucho por conocer acerca de la expresión de las proteínas PIWI fuera de su contexto fisiológico canónico, en la línea germinal. Entre estas incógnitas, se encuentra la dinámica subcelular de PIWIL1 a lo largo del ciclo celular. Por ello, intentamos aproximarnos a la caracterización de la localización de PIWIL1 mediante el clonado de cuatro construcciones de dicha proteína taggeada tanto con eGFP y mRuby para su sobre-expresión en la línea celular modelo de cáncer de colon humano, Caco-2. Las construcciones consisten en: E1-E3 (Exones 1-3) que incluye la NLS (señal de localización nuclear) predicha, E10-E21 (Exones 10-21) que incluye el dominio PIWI pero no la NLS, E1-E21 (Exones 1-21) correspondiente a la Isoforma 1 completa de PIWIL1 que incluye la NLS, y E4-E21 (Exones 4-21) correspondiente a la Isoforma 2 que carece de la NLS. A la hora de abordar los clonados propuestos, enfrentamos dificultades sobre todo en las construcciones de mayor tamaño. Se pudo llegar al clonado en vectores de expresión planteados para las construcciones E1-E3 y E10-E21, pero no así para E1-E21 y E4-E21. Los resultados obtenidos permitieron aproximarse a la localización subcelular de PIWIL1. Además se generó una herramienta que a futuro será utilizada por el grupo para realizar estudios del ciclo y división celular tanto in vitro como in vivo, profundizando así en la comprensión de esta proteína en el contexto oncogénico.