Efecto de la Nitración de la Green Fluorescent Protein

Abstract

La Green Fluorescent Protein (GFP) es una proteína presente en la medusa Aequorea victoria que se ha estudiado extensamente por sus características espectroscópicas, estructurales y su aplicación como sonda en modelos celulares. Se expresa la sfGFP recombinante en su forma wt y su mutante sfGFP150 que presenta en la posición 150 de la estructura primaria un codón stop UAG en la secuencia. A través del uso de un par tRNA sintetasa y tRNA, seleccionados específicamente para cargar en el codón stop UAG residuos de 3-nitrotirosina se prepara una proteína nitrada en forma sitio específica. La incorporación de 3-nitrotirosina fue comprobada a través de western blot y por espectrometría de masa. Se analizan los espectros de excitación y emisión de la GFP mononitrada (GFP150) y se comparan con la wt. Se estudia la estabilidad térmica y frente a agentes desnaturalizante de ambas proteínas GFP150 y wt.