Obtención de mutantes de Rhizobium meliloti resistentes a antibióticos

Abstract

El objetivo de este trabajo fue obtener mutantes resistentes a uno y dos antibióticos entre una población de cepas nativas de Rhizobium meliloti de la zona de Río Cuarto o provenientes de centros de colección. Se trabajó con 10 cepas, 5 salvajes y 5 derivadas de ellas, resistentes a 500 æg/ml de estreptomicina. En la evaluación de la resistencia natural de las cepas frente a 6 antibióticos se apreció comportamiento similar entre las cepas madres y las mutantes resistentes a estreptomicina. La resistencia a este antibiótico fue muy marcada, sugiriendo producción abundante de estreptomicina en los suelos. La concentración inhibitoria mínima (CIM) fue también elevada para el cloranfenicol y la espectinomicina (400 y 900 æg/ml respectivamente). Se obtuvieron mutantes resistentes naturales a uno y dos antibióticos en kanamicina, cloranfenicol, espectinomicina y gentamicina, solos o en combinación con estreptomicina (dos marcas). En ningún caso se observó dependencia a los antibióticos en estudio.

En la evaluación de la nodulación y la fijación biológica del nitrógeno en plántulas en medio axénico a nivel de cámara climatizada, se observó que ninguna cepa perdió la capacidad de formar nódulos, y éstos aparecieron en períodos de tiempo similares al de las cepas madres. En la acumulación de materia seca, tres cepas se comportaron igual al testigo nitrogenado, dos de ellas resistentes a dos antibióticos. La distribución de las mutantes con una marca y las resitentes a dos antibióticos, fue muy homogénea en el ensayo. Aparentemente la resistencia a antibióticos y la capacidad para fijar nitrógeno no están relacionadas y se mantienen las propiedades simbióticas de las cepas salvajes, por lo que estas mutantes son recomendadas en ensayos de persistencia y competencia en el suelo.