Obtención y caracterización de poliploides en citrus

Abstract

Los triploides resultan de la combinación de gametos haploides y diploides durante la hibridación sexual. Los gametos diploides pueden provenir de un tetraploide o ser gametos no reducidos (2n) procedentes de plantas diploides. Plantas tetraploides pueden ser originados por duplicación somática o hibridación somática. La hibridación somática a través de fusión de protoplastos en Citrus ha permitido la generación de nuevos genotipos tetraploides que combinen los genomas nucleares y citoplasmáticos de dos genotipos. Sin embargo, antes de realizar esta técnica, deben ser ajustados varios pasos con precisión. Los objetivos de esta tesis fueron: A) determinar el mecanismo y el progenitor que produce gametos 2n que dan lugar a cuatro triploides espontáneos; B) confirmar la constitución genética de las plantas tetraploides obtenidos por duplicación somática; C) ajustar todos los pasos de la técnica de hibridación somática, incluyendo la obtención de callo embriogénico friable y la regeneración de embriones. En los objetivos A y B, la constitución genética de los triploides, tetraploides y sus parentales se estableció mediante el uso de marcadores moleculares codominantes. Los resultados indican que los gametos 2n pueden formarse tanto en el parental femenino como en el masculino, y la evidencia apoya que el mecanismo de formación de los gametos 2n es genéticamente equivalente a la restitución de la primera división meiótica. Los tetraploides formados por duplicación somática mostraron la misma constitución genética que sus genotipos parentales. En el objetivo C, los óvulos de ocho genotipos de mandarina fueron transferidos a medio de cultivo in vitro en tres fechas de siembra. Sesenta días después de la antesis, un aumento en la inducción de callo fue observado. Los mayores rendimientos de protoplastos viables se produjeron con callos de color blanco y hojas recogidas de una cámara de crecimiento a 100 lux y 28 °C. Para la fusión de protoplastos se evaluaron diferentes potenciales eléctricos. Tensiones de 250 V/cm para la alineación y 2000 V/cm para la fusión producen el mayor número de fusiones. La regeneración se lleva a cabo mediante protocolos establecidos, pero es una etapa compleja. Estos resultados proporcionan nuevas capacidades para generar variabilidad nacional y oportunidades para el mejoramiento de la fruta cítrica.