Colibri Colección : Incluye tesis de maestría y doctorado, realizadas en el Programa de Investigación Biomédica (ProInBio)

Rol de glicosilación aberrante en la reprogramación metabólica tumoral y su impacto sobre la expresión de PD-L1

2026-01-01T00:00:00Z

Título: Rol de glicosilación aberrante en la reprogramación metabólica tumoral y su impacto sobre la expresión de PD-L1 Autor: Rado, Guillermina Resumen: Las células cancerosas presentan una reprogramación metabólica caracterizada por una dependencia de la glicólisis anaerobia aun en presencia de oxígeno, fenómeno conocido como efecto Warburg. Esta alteración metabólica conduce a la producción de grandes cantidades de lactato en el microambiente tumoral (MAT), así como a un aumento del flujo de glucosa hacia vías alternativas de procesamiento, como la vía biosintética de las hexosaminas (HBP). Se ha reportado que el incremento del lactato en el MAT favorece el crecimiento tumoral y la evasión inmunológica de las células tumorales mediante el aumento de la expresión de PD-L1 en membrana, una molécula clave en la inmunorregulación. En paralelo, los adenocarcinomas presentan patrones de glicosilación aberrante (GA), los cuales se asocian con una mayor agresividad e invasión tumoral. En este contexto, resulta relevante destacar que la vía HBP es responsable de la generación del intermediario carbohidrato común UDP-GlcNAc, necesario tanto para la glicosilación intracelular como extracelular de las proteínas. En función de estos antecedentes, el objetivo del presente proyecto es analizar cómo la O-glicosilación aberrante se asocia con el metabolismo de la glucosa, y cómo estas alteraciones influyen en las características inmunoreguladoras de la célula tumoral. Para ello, se utilizó un modelo de cáncer de pulmón con GA desarrollado en nuestro laboratorio mediante la tecnología CRISPR/Cas9, a partir de la mutación de la chaperona COSMC en la línea tumoral murina de carcinoma de Lewis LL/2. Entre nuestros hallazgos, observamos que las células con GA presentan un metabolismo energético exacerbado en comparación con las células WT. Este fenotipo se caracteriza por un alto consumo de oxígeno junto con un metabolismo glucolítico predominantemente fermentativo. Asimismo, estas células exhiben una mayor actividad mitocondrial, un aumento en la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) y una expresión diferencial de enzimas metabólicas. Encontramos además una relación directa entre el metabolismo celular y la glicosilación proteica, ya que la utilización de múltiples inhibidores de enzimas metabólicas indujo un patrón alterado de reconocimiento por lectinas. En líneas generales produce alteraciones tanto en vías de la O-glicosilación y N-glicosilación membrana rías, como en la O-glicosilación intracelular. Otro hallazgo relevante fue que la inhibición de la producción de lactato mediante oxamato, un inhibidor de la lactato deshidrogenasa (LDH-A), incrementó la detección de PD-L1 a nivel proteico. De manera similar, la deglicosilación de PD-L1 mediante PNGasa-F aumentó su detección proteica. Sin embargo, en contraste con estos resultados, la inhibición de LDH-A se asoció con una disminución en la expresión de PD-L1 a nivel transcripcional. Finalmente, nuestro modelo de GA presentó una mayor detección de PD-L1 en células tumorales in vitro e in vivo, acompañada de una respuesta in vivo superior a la inmunoterapia anti-PD-L1. Además, evidenciamos que las células con GA fueron más susceptibles a la inhibición de LDH-A in vivo, reforzando la estrecha interrelación entre metabolismo, glicosilación y respuesta inmunológica tumoral. En conjunto, estos resultados respaldan un modelo en el cual la intersección entre el estado metabólico y las vías de glicosilación desempeña un papel central en la regulación de PD-L1 y en la modulación de la eficacia de la inmunoterapia, destacando a la GA como potenciales biomarcadores predictivos de respuesta a inmunoterapia.

Generación de modelos murinos para el estudio de virus zoonóticos emergentes

2026-01-01T00:00:00Z

Título: Generación de modelos murinos para el estudio de virus zoonóticos emergentes Autor: Arévalo, Ana Resumen: Las enfermedades virales emergentes de origen zoonótico representan un desafío creciente para la salud pública, generando la necesidad desarrollar modelos biológicos invivo bien caracterizados para estudiar los mecanismos de infección, patogénesis y transmisión viral y estrategias terapéuticas. El objetivo de esta tesis fue establecer y caracterizar dos modelos virales: virus de la hepatitis murina (MHV) y virus Mayaro (MAYV), integrando aproximaciones virológicas, fisiopatológicas, hematológicas, de transcriptómica y de imagenología. En el modelo de infección por MHV (subrogante de SARS-CoV-2) se evaluaron estrategias de reposicionamiento farmacológico. La Ivermectina redujo la carga viral hepática y mejoró el estado de salud de los animales infectados, sin evidenciar una modulación global de la respuesta inmune. En contraste, la Hemina favoreció la infección por el coronavirus murino, incrementando la diseminación sistémica y la carga viral en tejidos y sangre, aportando evidencia sobre el rol del eje hemo–virus en la patogénesis viral. Por su parte, el tratamiento combinado con Hemina y Cloroquina atenuó parcialmente la pérdida de peso y la patología orgánica, redujo las alteraciones histológicas en hígado, pulmón y bazo y disminuyó la carga viral sistémica. Además, contribuyó a normalizar las alteraciones hematológicas inducidas por MHV y el título viral en sangre, lo que sugiere que la cloroquina puede mitigar los efectos proinfectivos de la hemina y limitar la diseminación viral. Este modelo permitió además evaluar otros fármacos en estudios colaborativos, como Tocilizumab y los inhibidores VPC285786 y VPC285785, destacándose este último como un potencial antiviral oral frente a SARS-CoV-2. Por otra parte, se estableció un modelo murino de infección por MAYV donde se observó diseminación sistémica temprana con compromiso de tejidos somáticos, musculoesqueléticos y reproductivos, acompañada de alteraciones hematológicas compatibles con una respuesta sistémica a la infección viral. En el contexto de la preñez, los resultados que el estadio gestacional condiciona la permisividad placentaria y la exposición fetal al virus. Asimismo, la detección de virus infectivo en tejidos reproductivos y esperma aportó evidencia compatible con una potencial transmisión sexual, aunque con baja eficiencia. El uso de imagenología in vivo permitió un seguimiento longitudinal de la infección, confirmando la diseminación temprana y la persistencia viral en tejidos musculoesqueléticos. En conjunto, esta tesis refuerza la relevancia de los modelos murinos como plataformas experimentales robustas para la investigación preclínica en virología y para la generación de conocimiento con proyección traslacional en el estudio de virus emergentes de impacto en salud pública.

Epidemiología, pronóstico y tratamiento de pacientes con hemorragia subaracnoidea espontánea aneurismática: datos comparados de Uruguay y otros centros médicos de Latinoamérica

2026-01-01T00:00:00Z

Título: Epidemiología, pronóstico y tratamiento de pacientes con hemorragia subaracnoidea espontánea aneurismática: datos comparados de Uruguay y otros centros médicos de Latinoamérica Autor: Jaume Favaro, Alejandra Resumen: Introducción: La hemorragia subaracnoidea aneurismática (HSAa) continúa siendo una entidad de alta morbimortalidad, con heterogeneidad regional en incidencia, manejo y resultados. En Uruguay no existían datos de seguimiento prolongado y, a nivel latinoamericano, persisten controversias sobre la conducta óptima ante pacientes con aneurismas pequeños (≤5 mm). Objetivos: (i) Caracterizar clínica y morfo estructuralmente los aneurismas intracraneales de 5mm o menos (≤5 mm) en Latinoamérica, estimar la tasa de presentación con HSA en aneurismas ≤ 5 mm. Comparar resultados de los tratamientos endovascular, quirúrgico y conservador, e identificar predictores de rotura y de complicaciones. (ii) Describir el pronóstico a mediano plazo de una cohorte uruguaya de pacientes con HSAa diagnosticada entre 2019 y 2020 e identificar sus factores clínicos y sociales asociados al mal pronóstico. Métodos: Se llevaron a cabo dos estudios en paralelo: (A) uno multicéntrico, latinoamericano, retrospectivo que incluyó 1519 pacientes entre 2017 y 2023, con aneurismas ≤5 mm en 8 centros de 5 países. Se evaluaron variables clínicas, imagenológicas y terapéuticas, en búsqueda de identificar factores predictores de rotura del aneurisma, de complicaciones y de mal pronóstico. (B) El segundo, un estudio de una cohorte de 211 pacientes con HSAa en Uruguay, con seguimiento durante 3 años. Resultados: A. Estudio latinoamericano (≤5 mm): edad media 57 años (rango 13-98 años); siendo 56% mujeres. El 28% de los pacientes debutó con HSA. Tratamientos: 69% endovascular, 11% quirúrgico y 20% conservador. Observamos un 6% global de complicaciones (tratamiento endovascular 6% vs cirugía 11%; p=0,004). La mortalidad en el grupo de tratamiento endovascular fue de 8%, en el grupo de tratamiento quirúrgico fue de 11%, y en el grupo de seguimiento fue de 1%. La mortalidad y el mal pronóstico neurológico fueron mayores en pacientes con aneurismas rotos que en no rotos (mortalidad 18% vs 3%; p<0,001; mala evolución 31% vs 5%; p<0,001). Factores predictores independientes de ruptura: edad 40–60 años (OR:1,41), hipertensión arterial (OR:1,67), adicciones (OR:5,15), HSA previa (OR:1,90), morfología compleja (OR:2,73) y tamaño 3–5 mm (OR:2,08) (todos p<0,017). En pacientes con aneurismas no rotos tratados endovascularmente, la monoantiagregación se asoció con mayor mortalidad y peor evolución frente a doble antiagregación (p<0,001). La ocurrencia de complicaciones vinculadas al procedimiento se relacionó fuertemente con mortalidad (31% vs 7%; p<0,001) y mala evolución (41% vs 12%; p<0,001) independientemente del tipo de tratamiento realizado. B. Cohorte uruguaya (HSAa): la mortalidad acumulada a 3 años fue de 54,5%; con una buena evolución (mRS 0–2) en un 38% de los pacientes. Los predictores independientes de mala evolución a 3 años fueron: edad >65 años (RR:2,32), HSA grave (WFNS 4-5) al ingreso (RR: 2,80) y falta de acceso a rehabilitación (RR: 2,50). En los 156 pacientes tratados, la cirugía y la experiencia operatoria ≤10 aneurismas/año duplicaron el riesgo de complicaciones frente a embolización y >10/año (OR:2,4 cada uno), sin impacto independiente en mortalidad ni en evolución a largo plazo. Conclusiones: Este trabajo constituye el primer estudio multicéntrico latinoamericano sobre pacientes con aneurismas intracraneales de ≤5 mm y el primero con seguimiento nacional a 3 años de HSAa en Uruguay. Se observó que casi un tercio de los pacientes con aneurismas ≤5 mm debutaron con HSA, especialmente en presencia de factores clínicos y morfológicos de riesgo. Tanto la cirugía como la embolización fueron seguras en centros especializados, aunque las complicaciones se asociaron a peor pronóstico. En Uruguay, la mortalidad a 3 años fue elevada y el acceso a rehabilitación emergió como un determinante clave de la evolución funcional. Estos hallazgos refuerzan la necesidad de protocolos estandarizados y de un abordaje multidisciplinario adaptado a la realidad regional.

Estudio morfológico de las mitocondrias espermáticas como fundamento de la fisiología espermática normal y de la infertilidad en el varón

2025-01-01T00:00:00Z

Título: Estudio morfológico de las mitocondrias espermáticas como fundamento de la fisiología espermática normal y de la infertilidad en el varón Autor: Skowronek, María Fernanda Resumen: El espermatozoide es una célula haploide, muy especializada que se encuentra tanto morfológica como funcionalmente diseñada para cumplir su función de fertilización. Consta de una cabeza donde se encuentra el material genético que permitirá reconstituir la diploidía al fusionarse con el núcleo del ovocito y una cola o flagelo que le permitirá alcanzarlo y fecundarlo. Durante la espermatogénesis, los espermatozoides pierden la mayoría de sus organelos junto con gran parte del contenido citoplasmático, pero conservan las mitocondrias. Las mitocondrias espermáticas se encuentran localizadas en la primera parte del flagelo, la pieza media, y se disponen siguiendo un patrón helicoidal, dando giros en torno al axonema. Se conectan entre sí a través de puentes disulfuro y al citoesqueleto subyacente a través de complejos proteicos, generando una estructura relativamente rígida. Además, fallas en el preciso ordenamiento mitocondrial podrían conducir a alteraciones en la motilidad, a la producción de espermatozoides defectuosos y a problemas para la fertilización. Los espermatozoides adquieren su potencial fecundante luego de permanecer en el tracto genital femenino a través de la capacitación. La capacitación consiste en una serie de cambios morfológicos, bioquímicos y funcionales que ocurren en el tracto genital femenino y lo preparan para la fecundación. Durante la capacitación, el espermatozoide sufre la reacción acrosómica y un cambio en el patrón de movimiento espermático denominado hiperactivación. Planteamos que cambios morfológicos en las mitocondrias pueden acompasar estos cambios funcionales del espermatozoide. Nos propusimos generar herramientas informáticas capaces de reconocer, medir y cuantificar cambios morfométricos a nivel de la pieza media espermática y de la propia mitocondria y aplicarlas al estudio de los espermatozoides. Postulamos que la función mitocondrial en los espermatozoides se refleja en cambios morfológicos de la pieza media y en particular de las mitocondrias durante la capacitación y, además, que dichos cambios morfológicos pueden ser indicadores de alteraciones de los espermatozoides en pacientes infértiles. Utilizamos imágenes de espermatozoides obtenidas por microscopía de epifluorescencia o por microscopía electrónica, las procesamos con softwares libres adaptándolos a la forma y tamaño de las mitocondrias en la pieza media, generando datos que nos permitieron describir y cuantificar cambios morfométricos. Como resultados: 1- Generamos scripts y algoritmos que ajustamos a las diferentes necesidades experimentales. 2- Evidenciamos, una reducción del área y ancho de la pieza media en espermatozoides de ratón que sufrieron la reacción acrosómica durante la capacitación. 3- En espermatozoides humanos, las piezas medias fueron más cortas y anchas en muestras de semen con alteraciones en el espermiograma que con espermiograma normal. El análisis ultraestructural en hombres infértiles, mostró mitocondrias grandes y ensambladas de forma irregular con mayor área y menor circularidad en el análisis morfométrico, similares a las mitocondrias de espermatozoides apoptóticos. 4- En sujetos sin alteraciones en los parámetros espermáticos, constatamos un aumento del área de la pieza media espermática luego de la incubación de los espermatozoides con drogas dirigidas a la mitocondria. A través de este trabajo logramos desarrollar herramientas informáticas para analizar la morfología mitocondrial en el espermatozoide, tanto a nivel celular como subcelular. Los resultados obtenidos revelan cambios en la morfología y organización mitocondrial en espermatozoides maduros de ratón y humanos en diversas condiciones. Dichos hallazgos sugieren que existen cambios en la morfología mitocondrial espermática que podrían ser base para el entendimiento de la etiopatogenia de la infertilidad. Los datos obtenidos destacan el potencial del algoritmo como una herramienta robusta para el análisis cuantitativo de la morfología mitocondrial y para su aplicación en diversos contextos para evaluar la calidad espermática y con potencial diagnóstico en el estudio del hombre infértil.